¿Qué parte de la antera se convierte en una planta completa cuando se cultiva in vitro?
Medio de inducción: ms 6-ba 1 mg/l NAA 0,1 mg/l; medio de proliferación: ms 6-ba 1 mg/l NAA 0,1 mg/l; 2 ms IBA 0,2 mg/L
Tratamiento con medio: el medio MS contiene 3 sacarosas, 0,7 agar, pH 5,8. Condiciones de cultivo: temperatura (25±65438±0)℃, luz solar 65438±04h, intensidad de luz 2000Lx.
Selección y esterilización de explantes
En el cultivo de tejidos, normalmente elegimos meristemas viables como puntas de brotes, yemas, brotes jóvenes y segmentos de tallo como cuerpo del explanto, pero las partes específicas deben ser juzgado de acuerdo con las características de diferentes plantas. Debido a que las puntas de los tallos jóvenes y las hojas de las plántulas son fáciles de recoger y postprocesar, y es fácil formar callos, cuando seleccionamos materiales de cultivo de tejidos, elegimos hojas de plántulas para el cultivo de tejidos.
Utiliza como materiales las hojas o cogollos de plántulas sanas, libres de enfermedades y plagas. Después de cortar el material, enjuáguelo con agua del grifo durante 1 a 2 horas, luego sumérjalo en líquido de lavado saturado durante 5 a 10 minutos, enjuáguelo con agua esterilizada durante 10 a 15 minutos para eliminar los residuos de la superficie y luego sumérjalo en 70 alcohol durante 20 segundos en estado estéril Enjuague una vez con agua esterilizada, luego enjuague con 0. Finalmente, enjuague el explante con agua estéril 4-5 veces, 65.438 ± 0-2 minutos cada vez. Utilice papel absorbente para absorber el agua en la superficie del explante. Corte las hojas en un tamaño de 5 mm x 5 mm e inocúlelas en un cultivo de inducción. sustrato y cultivado en condiciones estériles. La temperatura del cultivo es de 24 ℃ ± 2 ℃, la intensidad de la luz es de 1500 lx y la luz es de aproximadamente 10 horas al día.
3. Cultivo primario de plántulas
Ya se sabe que sólo en las condiciones más adecuadas las hojas de las plántulas cultivadas pueden desarrollarse mejor y germinar más rápido. Sé que bajo la composición y concentración óptimas del medio de cultivo, es más probable que las hojas de las plántulas formen callos e induzcan la brotación, independientemente de la concentración del medio de cultivo, afectará el desarrollo de los callos y las yemas de las plántulas, y en Los casos severos, incluso conducen a la muerte del explante.
Por lo tanto, según la situación real, inocularemos las hojas o yemas axilares esterilizadas en medio MS solidificado con agar 0,7, suplementado con NAA0,1 mg/L, BA0,1 mg/L, glucosa o sacarosa 3, y ajustar 3, pH a 5,8. Cultivar en una sala de cultivo a 25 ~ 30°C, intensidad de luz 1500 ~ 4000 LX y 14 horas de luz solar. Los explantes sembrados en medio de inducción comenzaron a germinar en aproximadamente 3 semanas. Un mes después, los explantes de hojas o yemas axilares se hinchan y forman una gran cantidad de tejido calloso y yemas. Cada explante puede producir un promedio de 30 a 40 yemas adventicias.
4. Subcultivo de plántulas
El cultivo inicial producirá una gran cantidad de plántulas sin raíces, por lo que se debe observar el crecimiento de las plántulas con frecuencia. Cuando la planta esté llena en la botella, debemos cortar las plántulas diferenciadas del cultivo primario de las partes media e inferior, y seleccionar el tejido de la punta del brote que crece bien para el cultivo posterior. En este proceso, primero se extraen las plántulas de lovegrass del tubo de ensayo y las hojas y tallos envejecidos se retiran con unas pinzas. Las hojas de plántula sanas seleccionadas se cortaron nuevamente, se colocaron en medio de subcultivo y se regresaron a la sala de cultivo de tejidos para su posterior cultivo. Elegimos un ciclo de 25 días, para que se pueda obtener una gran cantidad de plántulas mediante subcultivos repetidos varias veces.
Siempre observamos que al inducir el crecimiento de yemas estériles de 2 a 3 cm, las yemas agrupadas más grandes se cortan de los callos cultivados primarios y se transfieren al medio de subcultivo o se transfieren los brotes de racimos más pequeños directamente al medio de subcultivo. . Utilice medio básico MS 1 ppm 6-BA como medio de subcultivo para subcultivar cogollos agrupados. Cuando los brotes crecen, se transfieren a medio MS suplementado con NAA0,1 mg/L y BA0,1 mg/L, y los brotes pueden seguir creciendo hasta convertirse en plántulas. De esta manera, después de un mes de subcultivo, los brotes de racimo crecerán a un ritmo de 20 a 30 veces, y después de medio año se puede obtener una gran cantidad de plántulas de cultivo de tejidos de alta calidad.
Cultivo de enraizamiento de plántulas
Debido a que durante el proceso de subcultivo, el callo de las plántulas solo puede diferenciarse en yemas adventicias y yemas laterales, pero no puede inducir la diferenciación de raíces, la formación de raíces debe ser Inducción sobre medio de enraizamiento. Por tanto, debemos observar el crecimiento de las plántulas en cualquier momento. Cuando las plántulas subcultivadas crezcan de 3 a 5 folíolos, las plántulas sin raíces deben cortarse de la base de las plántulas, teniendo cuidado de no dañarlas, y transferir las plántulas al medio de enraizamiento en la mesa de operaciones estéril.
Bajo determinadas condiciones, las plántulas de cultivo de tejidos se pueden trasplantar directamente al sustrato y las raíces crecerán en unos 20 días. Sin embargo, para obtener plántulas de cultivo de tejidos grandes y robustas, las plántulas de cultivo de tejidos sin raíces se pueden trasplantar a un medio de 1/2 ms suplementado con 0,1 ppm de NAA y aparecerán pequeñas raíces en la base después de dos semanas. Estas plántulas crecen mejor y más rápido que las primeras.
6. Endurecimiento y preparación de plántulas antes de trasplantar plántulas de cultivo de tejidos.
Cuando las plántulas de tubo de ensayo miden de 2 a 3 cm de altura, tienen de 3 a 5 hojas y han desarrollado sistemas de raíces, Debe transferirse a la sala de aclimatación y sellar la boca de la botella para endurecer las plántulas. Durante este período, la temperatura y la luz en el invernadero se pueden mejorar adecuadamente. Después de estar cerrada durante 7 días, se debe abrir la tapa de la botella para adaptarla al ambiente externo y las plántulas deben endurecerse después de abrir la botella. Cuando las plántulas se utilizan para florecer, no se les permite florecer de inmediato. Cuando las plántulas se cultivan utilizando el método abierto, un tercio de las plántulas deben abrirse el primer día y la mitad debe adaptarse gradualmente a la humedad exterior después de dos días. Luego abra la botella al sexto día y el tiempo para endurecer las plántulas después de abrir la botella es más largo que cerrar la botella. Cultivar a unos 20°C durante 1 a 2 semanas en condiciones que reduzcan adecuadamente la humedad del aire. Dos días antes del trasplante, abra la tapa de la botella, agregue un poco de agua para ablandar el agar, luego saque las plántulas del tubo de ensayo y lave el agar en la base de las plántulas del tubo de ensayo para evitar la reproducción de bacterias y la pudrición de las raíces.
Las plántulas trasplantadas en probeta prefieren un sustrato fértil y suelto. La fórmula de la matriz seleccionada es turba, lodo de hongos y salvado de madera en una proporción de 2:1:1, y se puede agregar perlita adecuadamente. Antes del trasplante, esterilizar el sustrato en autoclave durante 65.438 ± 05 minutos, seleccionar una bandeja de plantación con un largo, ancho y alto de 48 × 30 × 5 cm, esparcir el sustrato en ella, regarla y dejarla por un tiempo. de tiempo, es decir, en ellos se pueden plantar plántulas de cultivo de tejidos.
7. Trasplante después del endurecimiento
La temperatura de las plántulas trasplantadas debe mantenerse entre 18 ℃ y 25 ℃, y la temperatura relativa del aire debe ser de alrededor de 80 °C. La tasa de supervivencia de las plántulas trasplantadas puede alcanzar más del 90%. No es necesario fertilizar las plántulas en las primeras etapas del trasplante y rociar agua cada 3-5 días. 20 días después del trasplante, las plántulas comienzan a crecer rápidamente. En este momento, la solución nutritiva se vierte una vez a la semana. Cuando las plántulas crezcan lo suficiente como para caber en la bandeja de plantación, se pueden plantar en macetas. El sustrato aún está seleccionado. Para fijar mejor el sistema radicular, se mezcla una cierta proporción de arena de río con el sustrato. El diámetro de la maceta elegida es de 6 cm. Cuando las plántulas crezcan y las raíces llenen la maceta, reemplace la maceta con un diámetro de 10 cm, que es más propicio para el crecimiento y la floración temprana de las plántulas.
8 Resumen
Los árboles jóvenes son flores en macetas de interior populares en el mundo. Para la propagación se suelen utilizar semillas y hojas con pecíolos, lo que no sólo provoca la separación de caracteres, la degradación de las plántulas y un bajo coeficiente de reproducción, sino que también lleva mucho tiempo cultivar una gran cantidad de plántulas uniformes. El cultivo de tejidos de plántulas es conveniente y económico, y se pueden obtener plántulas exitosas en tubos de ensayo en poco tiempo. Este estudio explora una solución factible para la rápida propagación de plántulas utilizando tecnología de cultivo de tejidos, proporcionando una base científica para expandir la propagación de plántulas y obtener una gran cantidad de excelentes plántulas de cultivo de tejidos en un corto período de tiempo. Existen oportunidades ilimitadas de desarrollo para la tecnología de cultivo de tejidos de plántulas. Una utilización razonable no sólo puede promover el desarrollo económico y social regional, sino también promover el desarrollo de la industria floral de mi país. Las condiciones de cultivo que exploramos sentaron las bases para la producción industrial de plántulas de cultivo de tejidos en el futuro.