Información básica sobre las cepas
Jūnzhǒng fonético
La definición se refiere al material de propagación compuesto por hongos comestibles, hongos industriales, micelio de hongos agrícolas y su matriz de crecimiento. Las bacterias son materiales básicos para la investigación en microbiología y ciencias biológicas. En el campo médico, existe un conjunto completo de métodos para la preparación de productos de diagnóstico, producción de vacunas, investigación sobre patogenicidad microbiana, pruebas antibacterianas de medicamentos y pruebas microbianas de medicamentos. Las cepas de bacterias se dividen en tres niveles: especies madre (especies primarias), especies originales (especies secundarias) y especies cultivadas (especies terciarias). ①Con este método se pueden conservar las bacterias productoras de esporas, los actinomicetos y los mohos, es decir, mezclar arena y tierra en una proporción de 3:2, lavar y tamizar con ácido diluido y colocarlos en pequeños tubos de ensayo. La altura del dispositivo es de 1 cm; esterilice de 2 a 3 veces y, después del secado, use de 2 a 2,5 ml de agua destilada estéril para hacer una suspensión de esporas a partir de las esporas que crecen bien en el medio de cultivo en pendiente. Agregue una pequeña cantidad a la arena. tubo y vacío, de apariencia seca y suelta, almacenado en refrigerador a 4°C, la vida útil puede ser de 5 a 7 años.
② Método de liofilización, mezcle la suspensión de esporas con un agente protector (generalmente leche descremada o suero), colóquela en un tubo de ampolla y congélela rápidamente en un baño de etanol a -20 ~ -30 ℃ . Luego, utilice una bomba de vacío para drenarlo a baja temperatura, congele el vapor de agua con pentóxido de fósforo o hielo seco, selle el tubo de la ampolla y guárdelo a baja temperatura. La vida útil puede ser de 5 a 10 años.
③ Método de sellado con aceite de parafina: vierta aceite de parafina esterilizado en la pendiente del cultivo bacteriano, 1 cm por encima de la pendiente, y guárdelo en un refrigerador a 4 °C o en un lugar seco a baja temperatura. Este método no es. aplicable. Los microorganismos que pueden utilizar aceite de parafina como fuente de carbono tienen una vida útil de más de un año. 1. El concepto original de cepa se refiere a esporas (equivalentes a semillas de plantas), pero en la producción real, el micelio puro cultivado artificialmente junto con el medio de cultivo a menudo se denomina cepa.
2, los tipos de cepas son divididas en cepas madre, cepas originales y cepas cultivadas según su origen, generaciones de reproducción y propósitos de producción durante la producción. Se denominan especies primarias, especies secundarias y especies de tercer nivel respectivamente.
Especies madre: micelio puro. o las esporas se propagan en un medio de cultivo de tubo de ensayo. La especie original se puede propagar y es adecuada para la conservación de cepas bacterianas.
Especie original: el micelio de la especie madre se cultiva en un medio sólido. la adaptabilidad del micelio al entorno de cultivo y juega un papel en la expansión. Las especies originales pueden producir hongos directamente.
Especies de cultivo: expandidas a partir de las especies originales. Tiene principalmente el propósito de propagarse y proporcionar cepas suficientes. para producción, que se puede dividir en los siguientes métodos:
(1) Método de untado en pliegues: seleccione fresco, fuerte, sin abrir. Los cuerpos fructíferos intactos deben lavarse y esterilizarse la superficie con cloruro de mercurio al 0,1% o Alcohol al 75% durante 2 minutos, luego se introduce en la caja de inoculación junto con el medio de cultivo, se fumiga y se esteriliza con formalina durante 12 a 24 horas, y luego se aplica el asa de inoculación sobre las branquias del cuerpo fructífero según técnicas operativas asépticas, se inocula. el bucle de inoculación que contiene esporas en el medio de cultivo y finalmente colocarlo en una incubadora de 25-28 ° C para el cultivo para obtener cepas puras.
(2) Método de recolección de huellas de esporas: tome un portaobjetos de vidrio esterilizado, papel de prueba o un paño negro y colóquelo debajo de las branquias hijas frescas, sin abrir o sin dehiscentes. Después de 24 horas, las esporas caen y forman una huella (es decir, una huella de espora). Luego, use un asa de inoculación o una varilla de vidrio para sumergir las esporas, inocularlas en un medio plano o inclinado y realizar un cultivo a temperatura constante para obtener cepas puras.
(3) Método de recolección del recolector de esporas: el recolector de esporas consta de una campana de vidrio, una placa de Petri, un trípode, una placa de esmalte, etc. Debajo de la campana hay una placa de esmalte con un diámetro de aproximadamente 25 cm. Primero se recubre la placa con 4 a 6 capas de gasa y en el centro se coloca un par de placas de Petri de 9 cm de diámetro. , y encima se coloca el pequeño, con la boca hacia arriba. Luego, coloque un trípode hecho de alambre conductor en la pequeña placa de Petri de arriba, luego cubra la campana de vidrio con agujeros, tape el agujero en la cubierta superior con un tapón de algodón y, finalmente, envuelva todo el recolector de esporas con una gasa, colóquelo en un autoclave o vaporera para esterilizar durante 2 horas.
Después de la esterilización y desinfección, el recolector de esporas se coloca en una habitación o caja esterilizada. Luego, use un cuchillo para cortar un trozo de 4-5 cm del cuerpo fructífero e insértelo en la parte superior del trípode en el recolector (si no hay un recolector de esporas, se puede usar una placa de Petri en su lugar). Luego se incuba durante 24 horas a una temperatura de 24 a 26 °C. En la placa de Petri se verá una materia en polvo blanca, que es la espora.
En este momento, el recolector de esporas se puede mover a la caja de inoculación, sacar la placa de Petri, taparla y agregar de 10 a 20 ml de agua esterilizada a la placa de Petri para dispersar las esporas en la suspensión de esporas. Luego, use una jeringa o pipeta estéril para absorber la suspensión de esporas, inocúlela en el medio de cultivo inclinado del tubo de ensayo e inyecte de 2 a 3 gotas en cada tubo. Después de cultivar durante 5 a 7 días a una temperatura de 24 a 26°C, crecerán colonias blancas en el medio de cultivo. Cuando el diámetro de la colonia alcance 0,5 cm, seleccione una colonia robusta y transfiérala al medio inclinado de otro tubo de ensayo para su cultivo. Cuando el micelio blanco crece sobre el tubo de ensayo, se obtiene una cepa pura. Es decir, las astillas de madera se retiran del cuerpo huésped donde crecen ciertos hongos (como Poria cocos y segmentos de madera de hongos) y se separan. Por ejemplo, al producir semillas de hongos, puede elegir orejeras (es decir, segmentos de madera con hongos creciendo en ellos) que sean silvestres, tengan flores grandes, muchas orejas y sean gruesas. Después de la recolección, retire la corteza debajo de la raíz de la mazorca y corte su sección transversal en astillas de madera de 1 cm de espesor. En condiciones estériles, corte la parte de las hifas sin orejas, dejando la parte de las hifas con orejas, y sumérjala en mercurio al 0,1%. que contiene agua durante 1 minuto, sáquelo y enjuague el líquido de mercurio sobre las astillas de madera con agua esterilizada. Luego, use un bisturí para cortar las rodajas de madera en trozos de 0,5 cm, colóquelas en un medio de cultivo inclinado y cultívelas entre 24 y 26 °C para eliminar bacterias diversas a tiempo y seleccionar micelio puro para trasplante y cultivo para obtener cepas bacterianas. .