Métodos de formulación de fármacos para la detección de proteínas.

Los métodos para medir proteínas se pueden dividir en dos categorías: uno se basa en cálculos basados ​​en las propiedades físicas y químicas de las proteínas, como densidad, índice de refracción, absorción ultravioleta, fluorescencia, etc.; el otro se calcula mediante métodos químicos, como por ejemplo; como determinación de nitrógeno y prueba de dicondensación de urea, reacción de unión de colorantes, reacción de reactivo de fenol, etc.

Los principales métodos de determinación son: método biuret, método de unión de colorantes, método de reactivo de fenol, espectrofotometría ultravioleta, colorimetría de ácido salicílico, método de refracción, método de rotación óptica y espectroscopia de infrarrojo cercano.

En la actualidad, el método más utilizado para medir proteínas es el método Kjeldahl, que determina el contenido de proteínas midiendo el nitrógeno total.

El método Kjeldahl determina el contenido de proteínas midiendo el contenido de nitrógeno total en la muestra y multiplicándolo por el coeficiente de proteínas correspondiente. El resultado de este método se denomina contenido de proteína cruda. Dado que la muestra contiene una pequeña cantidad de compuestos que contienen nitrógeno no proteicos, como ácidos nucleicos, alcaloides, lípidos que contienen nitrógeno, porfirinas, pigmentos que contienen nitrógeno y otros compuestos que contienen nitrógeno no proteicos, el método de determinación de nitrógeno de Kjeldahl es más preciso para determinar el contenido de nitrógeno orgánico total. Uno de los métodos simples que se pueden utilizar para el análisis de todos los alimentos animales y vegetales y diversos alimentos procesados. Todavía se utiliza como método de prueba estándar. Este método se puede utilizar para la determinación de proteínas en diversos alimentos.

El método Kjeldahl se puede dividir en método total, método de traza y método Kjeldahl modificado. En la actualidad, los métodos de determinación de nitrógeno Kjeldahl normal, semimicro y micro que utilizan sulfato de cobre como catalizador suelen tener menos calidad de muestra y consumo de reactivos, y existe un conjunto de equipos de determinación de nitrógeno micro Kjeldahl. Los principales problemas para mejorar el método de determinación de nitrógeno de Kjeldahl son el problema de la amonización completa del nitrógeno en compuestos nitrogenados y el problema de acortar el tiempo y simplificar la operación, es decir, el problema del catalizador utilizado para descomponer la muestra. El método Kjeldahl modificado constante añade dióxido de titanio al catalizador [4].

En los laboratorios físicos y químicos se suele utilizar el método micro Kjeldahl y el método Kjeldahl total para determinar el contenido de proteínas en los alimentos. Luego se llevaron a cabo extensos experimentos para comparar la precisión del micro Kjeldahl y del Kjeldahl total.

1. Materiales y métodos:

1.1 Materiales de prueba

1.1.1 Muestras de prueba

Harina

1.1.2 Fármacos y reactivos de prueba

Todos los reactivos son de grado analítico; el agua es agua destilada o agua de la misma pureza.

Sulfato de cobre;

Sulfato de potasio;

Ácido sulfúrico concentrado.

Solución de hidróxido de sodio 40: pesar 40 g de hidróxido de sodio, disolver en 60 ml de agua destilada;

4 solución de ácido bórico: pesar 4 g de ácido bórico, disolver en agua destilada y diluir a 100 ml;

solución de titulación estándar de ácido clorhídrico de 0,1 mol/L;

Solución indicadora mixta de azul de metileno y rojo de metilo: Mezcle la solución de etanol de azul de metilo (1 g/L) y la solución de etanol de rojo de metilo (1 g/L) en una proporción de volumen de 1:2.

1.1.3 Instrumentos y equipos:

Instrumentos de laboratorio convencionales y los siguientes elementos:

Matraz Kjeldahl: 500mL;

Eléctrico Regulable horno; dispositivo de destilación al vapor;

Picadora de carne:

Abertura de rejilla inferior a 4 nanómetros;

Triturador de tejidos;

Máquina rota;

Mortero: vidrio o cerámica;

Digestor químico,

Analizador de nitrógeno Kjeldahl,

Filtro de aire

1.2 Método de prueba

1.2.1 Método Micro Kjeldahl

Principio del método micro Kjeldahl

Uso de la muestra El ácido sulfúrico concentrado y el catalizador se calientan y digieren para descomponer proteínas. y el carbono y el hidrógeno que contienen se oxidan en dióxido de carbono y agua para escapar, mientras que el nitrógeno orgánico de la muestra se convierte en amoníaco, que se combina con ácido sulfúrico para formar sulfato de amonio. Luego retire 1/10 de la solución de hidrólisis y agregue destilación alcalina para destilar el amoníaco, absorberlo con ácido bórico y titularlo con una solución estándar de ácido clorhídrico o ácido sulfúrico [2]. A partir del consumo estándar de ácido se puede calcular el contenido de proteínas. Incluye cuatro pasos: digestión, destilación, absorción y titulación.

1.2.2 Método de determinación de nitrógeno total de Kjeldahl

Principio del método de determinación de nitrógeno de Kjeldahl

La muestra se calienta y se digiere con ácido sulfúrico concentrado y catalizador para descomponer el proteína, donde el carbono y el hidrógeno se oxidan en dióxido de carbono y agua para escapar, mientras que el nitrógeno orgánico de la muestra se convierte en amoníaco, que se combina con ácido sulfúrico para formar sulfato de amonio. Luego, todo el jugo digestivo se destila con álcali para evaporar el amoníaco, se absorbe con ácido bórico y luego se titula con una solución estándar de ácido clorhídrico o ácido sulfúrico. A partir del consumo estándar de ácido se puede calcular el contenido de proteínas. Incluye cuatro pasos: digestión, destilación, absorción y titulación.

2 Proceso de análisis

Preparación de la muestra: Muestra sólida: Tomar al menos 200g de una muestra representativa, triturarla con un mortero y triturarla finamente muestras que no sean fáciles de triturar; o moler se debe cortar en pedazos (cortar) en partículas finas; pulverizar la muestra sólida seca con un pulverizador: tomar al menos 200 gramos de muestra líquida completamente mezclada. Muestra de polvo: tomar al menos 200 g de muestra representativa (si el polvo es más grande, también se debe moler en un mortero) y mezclar uniformemente muestra de pasta: tomar al menos 200 g de muestra representativa y mezclar uniformemente muestra sólido-líquido; sólido Para la proporción líquida, tome al menos 200 g de una muestra representativa, tritúrelo con un machacador de tejidos y mezcle uniformemente para productos cárnicos: tome al menos 200 g de una muestra representativa sin las partes no comestibles, píquelo al menos dos veces con un bisagra de carne y mezclar uniformemente. Las muestras anteriores deben colocarse en un recipiente de vidrio sellado, almacenarse en un refrigerador a 4°C para su uso posterior y medirse lo antes posible.

2.1 Proceso de análisis Micro Kjeldahl

2.1.1 Digestión de la muestra:

Pasos: Pesar con precisión una determinada cantidad de muestra y añadir 0,5 g de sulfato de cobre, 10 g de potasio. sulfato, 20 ml de ácido sulfúrico concentrado, varios trozos de perlas de vidrio → transfiéralo con cuidado a un matraz Kjeldahl de 500 ml seco y limpio (ponga el sólido o el polvo en un tubo de papel con un rollo de papel), agite suavemente y use 45? Sostenga en diagonal la malla de amianto con orificios pequeños → caliéntela con una estufa eléctrica a fuego lento (o coloque primero el matraz lejos de la estufa eléctrica), espere hasta que el contenido esté completamente carbonizado y la espuma deje de producir, luego aumente la potencia de fuego (o coloque el matraz en la estufa eléctrica), y mantenga la botella. Llevar el líquido a ebullición leve → continuar calentando ligeramente durante 30 minutos → esperar hasta que el líquido se vuelva azul verdoso y transparente → apagar el horno eléctrico, sacar el matraz, enfriar → transferir a un matraz aforado de 100 ml.

2.1.2 Destilación y absorción:

Instalar el dispositivo de destilación microfijador de nitrógeno como se muestra en la figura. Llene la botella del generador de vapor con agua hasta 2/3 de su volumen, agregue unas gotas de indicador de naranja de metilo y unos mililitros de ácido sulfúrico para mantener el agua ácida, y agregue unas perlas de vidrio. Agregue 10 ml de ácido bórico de 40 g/L y 2 gotas de indicador mixto a la botella receptora e inserte el extremo inferior del tubo del condensador debajo del nivel del líquido. Extraiga con precisión 10 ml de solución de digestión en el tubo de reacción, agregue 10 ml de solución de hidróxido de sodio a través del embudo, enjuague el embudo con una pequeña cantidad de agua destilada, cierre el embudo y séllelo con agua, caliente y hierva el agua en el Botella generadora de vapor para destilación. Después de que el indicador se vuelva verde, continúe la destilación durante 65438±00 minutos, levante la parte superior del tubo del condensador para separarla de la superficie del líquido y continúe la destilación durante 65438±0 minutos.