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Resumen

Esta enfermedad también se conoce como verrugas genitales, verrugas genitales o verrugas venéreas. Es una enfermedad de transmisión sexual causada por la infección por el virus del papiloma humano (virus del papiloma humano). Hay muchos tipos de virus del papiloma humano. Los principales tipos que causan la enfermedad son el VPH 1, 2, 6, 11, 16, 18, 31, 33 y 35, incluidos el VPH 16 y 65438.

Diagnóstico

1. Historia de conducta sexual impura.

2. Las lesiones típicas son pápulas, excrecencias carnosas papilares, en forma de coliflor o cresta de gallo en partes húmedas como los genitales o la zona perianal, con superficies rugosas y queratinizadas.

3. La prueba del blanco de ácido acético es positiva y en los cortes patológicos se pueden observar disqueratosis y células huecas.

4. Las secuencias relacionadas con el ADN del virus del papiloma humano se pueden detectar mediante hibridación de ácidos nucleicos y las bandas de amplificación específicas del ADN del virus del papiloma humano se pueden detectar mediante PCR.

Medidas de tratamiento

Dado que actualmente no existen fármacos antivirales específicos, el tratamiento de las verrugas genitales debe utilizar un tratamiento integral.

(1) Incentivos al tratamiento: (leucorrea excesiva, prepucio excesivo, gonorrea).

(2) Mejora la inmunidad del organismo.

(3) Aplicación de fármacos antienfermedades. Generalmente, se puede curar siempre que se cumplan las reglas de un tratamiento integral.

1. Tratamiento quirúrgico

Para las verrugas genitales pequeñas y únicas, se puede realizar la extirpación quirúrgica; para los condilomas acuminados grandes, se puede utilizar la cirugía de Mohs y se puede realizar un examen de sección congelada durante el tratamiento. funcionamiento.

2. Crioterapia

Utilice nitrógeno líquido a baja temperatura a -196 °C para realizar crioterapia presurizada en las verrugas genitales para promover la necrosis y la eliminación del tejido verrugoso. Este método es adecuado para las verrugas genitales con un número pequeño y un área pequeña. Son factibles 1-2 tratamientos, con un intervalo de una semana.

3. Terapia con láser

El láser de CO2 se suele utilizar para tratar las verrugas genitales mediante cauterización. Este tratamiento es mejor para las verrugas genitales en la vulva, el pene o el área perianal. Se pueden tratar una sola o una pequeña cantidad de verrugas genitales múltiples a la vez, mientras que las verrugas genitales múltiples o más grandes se pueden tratar en 2 o 3 veces, generalmente con un intervalo de una semana.

4. Terapia de electrocauterización

Utiliza electroacupuntura de alta frecuencia o electrocirugía para eliminar las verrugas genitales. Método: electrocauterio después de anestesia local. Este tratamiento es adecuado para las verrugas genitales que son pequeñas en número y de área pequeña.

5. Terapia con microondas

Utilice una máquina de tratamiento quirúrgico con microondas y anestesia local con lidocaína. Inserte la punta de la sonda de radiación en forma de varilla en la base de la verruga. se vuelve más pequeño y el color cambia. Cuando la sonda es profunda y cambia de blanda a dura, se completa el curado por radiación y se puede sacar la sonda. Las lesiones coaguladas se pueden eliminar con fórceps. Para evitar la recurrencia, la porción restante de la base se puede coagular nuevamente.

6. Terapia con rayos beta

Hemos logrado resultados satisfactorios utilizando rayos beta para tratar las verrugas genitales. Este método tiene las ventajas de una alta eficacia, ningún dolor, ningún daño, pocos efectos secundarios y una baja tasa de recurrencia, y es digno de promoción clínica.

7. Terapia farmacológica

(1) Plátano: Esta terapia es adecuada para las verrugas genitales en zonas húmedas, como el glande, el perineo y otras partes donde el prepucio es demasiado largo y no está circuncidado. . Pero las verrugas genitales no se pueden tratar con podofilina. Antes de aplicar tintura de trementina al 20% sobre la lesión o tomar medicamentos, primero use un ungüento antibacteriano a base de aceite para proteger la piel normal o las membranas mucosas alrededor de la lesión y luego aplique el medicamento. Después de su uso, enjuague con agua con ácido bórico al 30%. o agua con jabón durante 4-6 horas, y repetir después de 3 días si es necesario. Este fármaco es el primer fármaco extranjero utilizado para tratar esta enfermedad y se puede curar de una sola vez. Sin embargo, tiene muchas desventajas. Provoca grandes daños en los tejidos y un uso inadecuado puede provocar úlceras locales. Es tóxico y se manifiesta principalmente como náuseas, obstrucción intestinal, leucopenia y trombocitopenia, taquicardia, incontinencia urinaria u oliguria, por lo que debe utilizarse con precaución. Cuando se encuentran las reacciones anteriores, se debe suspender el medicamento inmediatamente.

(2) Medicamentos antivirales: se puede utilizar de forma externa 5 crema de ftalamida o 0,25 de crema para herpes, dos veces al día. Tome aciclovir por vía oral, 200 mg cada vez, 5 veces al día, o use su pomada externamente e inyecte interferón-α, 3 millones de unidades al día, 5 días a la semana. O inyecte 3 millones de unidades de interferón en la base de la verruga dos veces por semana.

Después de 2 a 3 semanas, el efecto secundario principal es el síndrome similar a la influenza y los efectos secundarios de los medicamentos tópicos son menores y más leves.

(3) Corrosivo o desinfectante: comúnmente se utiliza ácido tricloroacético 30-50 o ácido dicloroacético saturado, o ácido peroxiacético 18. Utilice una solución mixta de ácido acético glacial de ácido salicílico al 10% o formaldehído al 40%, fenol licuado al 2% y agua destilada con etanol al 75%, y aplíquela externamente en el glande y las verrugas genitales perianales una vez al día o en días alternos. muy bien. El desinfectante se puede usar externamente con tintura de yodo al 20%, o tintura de yodo al 2,5-5% inyectada en la base de la verruga, 0,1-1,5 ml cada vez, o tintura de yodo al 0,1-0,2% para uso externo, esta última debe combinarse con tratamiento sistémico.

(4) Medicamentos anticancerígenos

① 5-Fluorouracilo (5-F u): Generalmente se utiliza 5-fluorouracilo o crema de forma externa, dos veces al día y durante 3 semanas. es un curso de tratamiento. Utilice una compresa húmeda de 2,5 ~ 5 fluorouracilo para tratar las verrugas genitales alrededor del pene y el ano. Aplique durante 20 minutos cada vez, una vez al día, 6 veces como tratamiento. También se puede usar polietilenglicol como matriz, y se puede agregar polvo de 5-FU que representa el 5% de la materia seca para hacer un supositorio, que también se puede usar para tratar el condiloma uretral en hombres y mujeres. Se inyecta en la matriz y se pueden inyectar varios tipos en lotes.

② Taitipa: Se utiliza principalmente para las verrugas genitales intrauretrales que son ineficaces en el tratamiento con 5-FU. Utilice supositorios (cada cápsula contiene 15 mg) durante 8 días, o agregue 60 mg de este producto a 10-15 ml de agua esterilizada. , que se gotea en la uretra durante media hora cada semana, tiene el efecto secundario de la uretritis. También puedes utilizar 10 mg de este producto más 10 ml para remojar la zona afectada tres veces al día durante media hora cada vez para tratar el condiloma del pene y el condiloma del glande, principalmente para aquellos que aún tienen verrugas residuales o recaídas después de otros tratamientos. También puedes diluir esta solución dos veces y remojarla localmente para evitar que vuelva a aparecer.

Colchicina: Aplicación externa de 2-8 solución salina en dos dosis, con 72 horas de diferencia, para tratar las verrugas genitales del pene. Puede producirse erosión superficial después de la aplicación.

④ Fotomicina o pingyangmicina: Inyecte 0,1 solución salina en la lesión cutánea. La cantidad total de cada inyección se limita a 1 ml (1 mg). La pingyangmicina es un sustituto de la fotomicina y su uso es básicamente el mismo. Pingyangmicina 10 mg también se puede disolver en 10 procaína para inyección.

8. Inmunoterapia

① Método de vacuna autóloga: Homogeneizar el tejido verrugoso del propio paciente (fundir y congelar para inactivar el virus), calentar (56°C durante una hora), tomar la El sobrenadante e inyectarlo se puede utilizar para las verrugas genitales perianales rebeldes.

②Inductor de interferón: se puede utilizar polimiocitosis y tirosolona. La inyección de polimiocitos es de 2 ml cada día durante 10 días y el medicamento se continúa durante 1 a 2 meses después de su retirada. Tirolona 300 mg, 3 veces al día, 4 días de descanso o 600 mg por vía oral en días alternos.

③La aplicación combinada de interferón, BCG-ⅱ, lingitromicina y Libato tiene mejor eficacia.

Etiología

El virus del papiloma humano provoca verrugas en la piel y lesiones proliferativas en faringe, zona perianal y mucosa genital. Su tipo de virus es un pequeño virus de ADN. La mayoría de las lesiones causadas por la infección por el virus del papiloma humano son benignas y se resuelven espontáneamente, pero algunas pueden empeorar. Por ejemplo, se ha informado de carcinoma de células escamosas en la mucosa perianal y genital. También existe una enfermedad genética rara de la piel, cáncer de piel secundario a epidermodisplasia verruciforme (EV), y se ha detectado virus del papiloma humano en las células cancerosas.

El virus del papiloma humano es un miembro del género A de la familia Papaviridae. La cubierta del virus está compuesta por un icosaedro con un diámetro de 50-55 nm y un ADN bicatenario circular de 7900 pares de bases. El tamaño y la forma de las partículas del virus bajo microscopía electrónica son muy similares a los del poliomavirus oral. Los virus del papiloma (PV) son específicos de cada especie y los virus del papiloma humano no pueden propagarse en cultivos de tejidos ni en modelos animales experimentales.

La composición de proteínas estructurales del virus: 85 partículas PV, SDS-PAGE mostró que el virus tiene una proteína de la cápside principal con un peso molecular de 56.000 y se encontró una proteína de la cápside secundaria con un peso molecular de 76.000; tener cuatro grupos de células La proteína está asociada al ADN viral.

La estructura genómica de todos los virus del papiloma humano es similar. Los tipos y subtipos virales se pueden determinar basándose en procedimientos de hibridación de ADN en condiciones estrictas.

Sólo 50 tipos diferentes de virus del papiloma humano se hibridan con otros tipos de ADN viral. Hasta la fecha se han descubierto más de 60 tipos de virus del papiloma humano. A medida que continúe la investigación, se descubrirán más tipos nuevos de virus del papiloma humano.

Patogenia

La infección por el virus del papiloma humano condiloma acuminata se transmite a través del contacto sexual y las pequeñas heridas en el lugar del contacto pueden promover la infección. Los tres tipos de epitelio escamoso (cutáneo, mucoso y metaplásico) son susceptibles a la infección por el virus del papiloma humano. Cada tipo de virus del papiloma humano se asocia con lesiones clínicas específicas y tiene su propio sitio de predilección en la piel o el epitelio escamoso de la mucosa. La infección puede ocurrir cuando células superficiales desprendidas o fragmentos de queratina que contienen un gran número de partículas virales ingresan a las hendiduras del epitelio susceptible, ya sea por contacto directo o, raramente, por autoinoculación o por ropa interior, bañeras, toallas de baño o orinales contaminados.

Después de que el virus infecta el cuerpo humano, puede permanecer inactivo entre los queratinocitos basales y replicarse en la capa de células epidérmicas. El virus del papiloma humano invade el núcleo de las células, provocando que las células se dividan rápidamente, acompañadas de la reproducción y diseminación de partículas virales, formando papilomas característicos. En la etapa posterior, se expresan polipéptidos estructurales, es decir, aparecen partículas de ensamblaje de proteínas estructurales. El virus se concentra principalmente en el núcleo de la capa granular y hay muchas células huecas en la capa granular de la epidermis. Las células epiteliales histológicamente normales también pueden albergar el virus del papiloma humano, y el ADN residual después del tratamiento a menudo conduce a la recurrencia de la enfermedad.

La respuesta inmune del huésped a la infección por el virus del papiloma humano incluye inmunidad celular e inmunidad humoral.

En primer lugar, la inmunidad celular

El estado inmunológico celular del cuerpo humano es uno de los fundamentos importantes que afecta la aparición y el pronóstico de las verrugas genitales. La inmunidad celular es más importante que la inmunidad humoral. Clínicamente, los pacientes con condiloma acuminado con deficiencia de inmunidad celular a menudo tienen erupciones cutáneas persistentes, un mayor número de células T inhibidoras en la sangre periférica, función baja de las células NK y producción reducida de interferón r e interleucina-2. Sin embargo, la infiltración de células T activadas y células NK a menudo ocurre en las lesiones de las verrugas en regresión, y algunos queratinocitos son HLA-DR positivos.

La incidencia de infección genital por virus del papiloma humano y enfermedades relacionadas con el virus del papiloma humano aumenta con la inmunosupresión o la inmunodeficiencia. Las células T colaboradoras se agotan en las verrugas genitales y la proporción CD4/CD8 está invertida, con un valor <1. En la sangre periférica de pacientes con CA, se encontró un aumento significativo en el porcentaje de células T supresoras/citotóxicas y una disminución en la proporción de células T auxiliares/inductoras y células T auxiliares/supresoras. Las células de Langerhans se redujeron significativamente en las lesiones de CA cervical y neoplasia intraepitelial cervical (NIC). La capacidad de las células NK para producir interferón gamma e interleucina-2 en pacientes con CA está reducida. La actividad citolítica de las células NK en los queratinocitos que contienen el virus del papiloma humano 16 se reduce en pacientes con papulosis por Acinetobacter baumannii y cáncer anorrectal, lo que puede deberse a defectos en el reconocimiento de células diana específicas de la enfermedad. Los queratinocitos en la CA cervical no expresan el antígeno MHC ⅱ ⅱ (HLA-DR), y la falta de esta función de presentación de antígeno destruirá la función de vigilancia inmunológica.

En segundo lugar, inmunidad humoral

Los resultados de las pruebas serológicas actuales muestran: ①La tasa de producción de anticuerpos anti-proteína tardía es de 25-65, que es mayor que la de los anticuerpos anti-proteína temprana. ②La tasa de detección de anticuerpos contra el virus del papiloma humano parece ser específica del tipo y no tiene reactividad cruzada; ③ los anticuerpos contra el virus del papiloma humano-16E7 están estrechamente asociados con la presencia de cáncer de cuello uterino; con cáncer de cuello uterino, recurrencia o signos recientes de infección por virus del papiloma ⑤ Se estima que la tasa positiva de anticuerpos IgG producidos por adultos y niños es la misma, y ​​​​la tasa positiva de diferentes tipos está entre 10 y 75 ⑥ Solo 50-; El 70% de los pacientes con anticuerpos tumorales contra el virus del papiloma humano-16 o 18 pueden detectarse.

En tercer lugar, la regresión natural de las verrugas genitales

Actualmente no existe ninguna revisión sistemática sobre la regresión natural de la CA. Pero los estudios controlados con placebo encontraron tasas de regresión espontánea entre 0, 17, 18 y 69. Después de la resolución o curación de la CA, el 45% de los pacientes todavía tenían infección latente y 67 de ellos recayeron.

Epidemiología

1. Tasa de prevalencia

El condiloma acuminado es causado por el virus del papiloma humano. Actualmente se reconoce que la enfermedad va en aumento y se ha convertido en la enfermedad más común entre las enfermedades de transmisión sexual, con una tasa de prevalencia entre los adultos jóvenes que alcanza el 0,5-1.

La incidencia de verrugas genitales en el Reino Unido aumentó de 30/654,38 millones en 1970 a 2,60/654,38 millones en 1988, casi ocho veces, y en Estados Unidos aumentó seis veces entre 1966 y 1984. Al igual que el SIDA, las verrugas genitales sintomáticas sólo representan la cima del "iceberg" de personas infectadas, por lo que si se consideran las infecciones subclínicas, la infección por el virus del papiloma humano puede ser la enfermedad de transmisión sexual con mayor incidencia. La infección se transmite tanto directa como indirectamente, pero el contacto sexual es el más común y cuanto más cerca están las lesiones, más contagiosas son. Se estima que hay un 50% de posibilidades de infectarse mediante un contacto único. El segundo es el contacto directo no sexual, como la autoinfección y la infección neonatal a través del canal del parto; el segundo es el contacto indirecto, que puede transmitirse mediante contaminación y especulación, pero el virus no puede cultivarse ni confirmarse.

2. Factores de riesgo de las verrugas genitales

(1) Comportamiento sexual: El número de parejas sexuales y las relaciones sexuales prematuras son factores que conducen a la infección por el virus del papiloma humano.

(2) Inmunosupresión: la infección por el virus del papiloma humano y el cáncer relacionado con el virus del papiloma humano parecen ser complicaciones tardías de la inmunosupresión crónica. Los receptores de trasplantes de riñón tienen un mayor riesgo de padecer CA.

(3) Infección por VIH: aumenta la probabilidad de infección por el virus del papiloma humano y de tumores relacionados con el virus del papiloma humano.

(4) Edad y embarazo: la prevalencia máxima del virus del papiloma humano en frotis ginecológicos es entre los 20 y los 40 años, y la prevalencia disminuye constantemente con la edad la tasa de detección del virus del papiloma humano durante el embarazo Alta, la La tasa de detección del virus del papiloma humano disminuye después del parto.

Manifestaciones clínicas

El período de incubación es de 3 semanas a 8 meses, con un promedio de 3 meses. Es más común en hombres y mujeres jóvenes y de mediana edad sexualmente activos. La edad máxima es entre 20 y 25 años, y los pacientes masculinos y femeninos con una duración promedio de la enfermedad de 3 a 5 meses desarrollarán la enfermedad poco después del contacto sexual, mientras que los pacientes masculinos con una duración promedio de la enfermedad de 12 meses pueden no desarrollar la enfermedad. . La mayoría de los pacientes son generalmente asintomáticos. El daño varía en tamaño y forma. Pueden ser solo unas pocas o pueden ser tan grandes como la mayoría de las agujas: pueden crecer hasta convertirse en un gran objeto parecido a un tumor en la vulva y el ano, con una sensación de presión, y a veces pueden tener pequeñas verrugas genitales; causar picazón y malestar en la vulva, y la paciente puede experimentar hematuria y dificultad para orinar. Las verrugas genitales en el recto pueden causar dolor y heces con sangre, mientras que las verrugas genitales grandes en el recto pueden causar sensación de urgencia y luego pesadez.

Los pacientes masculinos tienden a presentarse en el frenillo, surco coronal, prepucio, uretra, pene, perianal y escroto. En la etapa inicial de la enfermedad, aparece como excrecencias miliares de color rojo claro o rojo sucio, de textura suave y ligeramente puntiagudas en la parte superior, que crecen o aumentan de tamaño gradualmente. Puede desarrollar una forma papilar o de saco, con una base ligeramente más ancha o una apariencia de banda, con gránulos en la superficie. A menudo crece en el ano, parece una coliflor y tiene una superficie húmeda o sangrante. A menudo hay pus entre las partículas, lo que desprende un mal olor, y puede producirse una infección después de rascarse. Las verrugas genitales localizadas en zonas secas y con poca humedad suelen ser pequeñas y planas. Las verrugas ubicadas en áreas cálidas y húmedas suelen ser filamentosas o parecidas a papilomas y tienden a fusionarse en trozos grandes. Las personas con enfermedad hepática grave pueden tener verrugas genitales agrandadas. El embarazo puede hacer que las verrugas genitales reaparezcan o aceleren su crecimiento.

La infección subclínica se refiere a lesiones que no pueden reconocerse clínicamente a simple vista. Sin embargo, el área infectada por el virus del papiloma humano puede volverse blanca aplicando 3-5 solución de ácido acético localmente o aplicándola húmedamente durante 5-10. minutos. Es el "fenómeno blanqueador del ácido acético".

Infección por virus del papiloma humano y tumorigénesis;

(1) El virus del papiloma humano está relacionado con la aparición de tumores de piel

Parece jugar un papel importante en el cáncer de piel y otro juega un papel decisivo en la anatomía de los tumores. El ADN de los virus del papiloma humano 11, 16 y 18 se puede encontrar en crecimientos benignos y lesiones precancerosas en la cavidad bucal y en el carcinoma de células escamosas de la piel. Se ha informado que los papilomas del virus del papiloma humano-6 en la laringe se transforman en cáncer de laringe, y la epidermodisplasia verruciforme (EV) es evidencia del posible papel cancerígeno del virus del papiloma humano. Muchos tipos de ADN del virus del papiloma humano se encuentran en las lesiones de enterovirus. Se detectaron virus del papiloma humano-5, virus del papiloma humano-8, virus del papiloma humano-14, virus del papiloma humano-17 y virus del papiloma humano-20 en el carcinoma cutáneo de células escamosas del paciente, que parecía ser causado por una malignidad debido a un daño viral preexistente.

(2) Verrugas genitales y cáncer anal

Existe una cierta relación entre el cáncer genital y los tipos de virus del papiloma humano.

La hibridación de ADN reveló la presencia del virus del papiloma humano-6, 11, 16, 18 en tejido canceroso genital.

1. Cáncer de cuello uterino: según la relación entre el virus del papiloma humano y el cáncer de cuello uterino, se divide en dos tipos: el tipo de bajo riesgo se refiere principalmente al virus del papiloma humano-6, 11 y el tipo de alto riesgo se refiere. al virus del papiloma humano-16,18. Gissmann et al observaron el 57,4% de los cánceres de cuello uterino invasivos. Otros han aislado el virus del papiloma humano-33 y el virus del papiloma humano-35 del cáncer de cuello uterino invasivo.

2. Carcinoma cutáneo de células escamosas (CCE): la CA causada por la infección por el virus del papiloma humano también puede ser una lesión precancerosa y puede convertirse en un CCE anogenital, lo que indica que el virus del papiloma humano es la principal causa de la vulva. en CCE de pene y anogenital. La CA, la CA gigante y el CCE verrugoso constituyen un espectro de lesiones precancerosas genitales y lesiones cancerosas. Algunos casos de cáncer genital tienen CA en la piel circundante, a veces visible a simple vista como CA típica, pero el examen histológico revela lesiones aisladas de SCC.

3. Papulosis bowenoide: común alrededor del pene, vulva o ano, y se ha encontrado ADN del virus del papiloma humano-16 en las lesiones cutáneas.

Examen auxiliar

Primero, prueba de ácido acético blanco

Aplique 3-5 ácido acético a la verruga durante 2-5 minutos. Las lesiones se volverán blancas y. Las lesiones anales ligeramente elevadas pueden requerir 15 minutos. El principio de este experimento es el resultado de la coagulación y blanqueamiento de proteínas y ácidos. La queratina producida por las células infectadas por el virus del papiloma humano es diferente de la queratina producida por las células epiteliales normales no infectadas, y sólo las primeras pueden despigmentarse con ácido acético. La prueba del blanco de ácido acético es muy sensible para detectar el virus del papiloma humano y es superior a las pruebas convencionales para observar cambios histológicos. Sin embargo, en casos de engrosamiento epitelial o abrasiones traumáticas, ocasionalmente pueden aparecer signos albinos falsos positivos y falsos positivos, que son poco claros e irregulares. Los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades de EE. UU. advierten que la prueba del blanco de acetato no es una prueba específica y que los falsos positivos son más comunes.

2. Examen inmunohistoquímico

El método de peroxidasa antiperoxidasa (PAP) se utiliza a menudo para mostrar proteínas virales en las verrugas genitales para demostrar la presencia de antígenos virales en las lesiones de las verrugas. Cuando la proteína del virus del papiloma humano es positiva, las células epiteliales superficiales de las verrugas genitales pueden tener una reacción positiva de color rojo claro.

Tres. Examen histoquímico

Se extiende una pequeña cantidad de tejido enfermo y se tiñe con anticuerpos específicos contra el virus del papiloma humano. Si hay antígenos virales en las lesiones, los antígenos y los anticuerpos se unen. En el método de peroxidasa-antiperoxidasa (PAP), los núcleos celulares pueden teñirse de rojo. El método es específico, rápido y útil para el diagnóstico.

4. Examen patológico

Las razones principales son disqueratosis, hipertrofia de las apófisis espinosas altas, hiperplasia papilomatosa y engrosamiento y extensión de las apófisis epidérmicas. El grado de proliferación puede ser similar al del pseudoepitelioma. . Había una cantidad considerable de mitosis entre las células espinosas y basales, que parecían cancerosas. Sin embargo, las células están dispuestas de forma regular y el límite entre el epitelio hiperplásico y la dermis es claro. Se caracteriza por una evidente formación de vacuolas en las células superiores de la capa granular y la capa espinosa. Estas células vacuolares son más grandes que las células normales, tienen un citoplasma pálido y un núcleo grande, redondo y profundamente basófilo en el centro. Por lo general, la dermis está edematosa, con telangiectasia y un denso infiltrado inflamatorio crónico circundante. La epidermis del condiloma gigante de Bushke-loewenstein crece extremadamente hacia abajo, reemplazando el tejido subyacente y se mezcla fácilmente con células escamosas, lo que requiere múltiples biopsias. Si hay tendencia a desarrollarse lentamente, se trata de un proceso de transformación maligna de bajo grado, que se denomina carcinoma verrugoso.

Diagnóstico genético verbo (abreviatura de verbo)

Hasta ahora, es difícil detectar el virus del papiloma humano con técnicas tradicionales de cultivo de virus y serología, y la principal tecnología de diagnóstico experimental es la hibridación de ácidos nucleicos. . El método de PCR desarrollado en los últimos años tiene las ventajas de especificidad, sensibilidad, simplicidad y rapidez, y ha abierto una nueva vía para la detección del virus del papiloma humano.

(1) Recolección y procesamiento de muestras

1. Recolección y preprocesamiento de muestras: use un raspador o un hisopo de algodón empapado en solución salina para recolectar secreciones y células de la vagina y el orificio cervical externo. . Al mismo tiempo que el examen citológico, coloque la muestra en 5 ml de PBS que contenga 0,05 de tiomersal, lávela dos veces con centrifugación en PBS (3000 g, 10 min), resuspenda las células precipitadas en 1 ml de PBS y extraiga el ADN de 0,5 ml de suspensión celular. .

2. Extraer el ácido nucleico de la muestra: Según 1 volumen de suspensión celular, añadir 10 volúmenes de solución de lisis celular (Tris-HCl 10 mmol/L, pH 7,4, EDTA 10 mmol/L, 150 mmol/L). NaCl, 0,4 SDS, 6550. Extraer dos veces con el mismo volumen de fenol/cloroformo (1:1) y cloroformo/alcohol isoamílico (24:1); añadir 1/10 de volumen de 3 mol/l de NaAc (pH 5,2) y 2,5 dobles; el volumen de etanol absoluto, colocar a -20°C durante 2 horas o durante la noche para precipitar el ADN, lavar una vez con 1 volumen de etanol, disolver el ADN en 60 µl de solución de TE que contenga ribonucleasa (100 µg/ml de Tris-HCl; pH 8,0, EDTA 1,0 mmol/l), incubar a 37 °C durante 30 minutos

(2) Amplificación por PCR

1 Diseño y síntesis de cebadores: el genoma del virus del papiloma humano puede ser Dividida en región temprana (E) y región tardía (L), cada región contiene una serie de marcos de lectura abiertos (orf). El análisis de secuencia muestra que la región no codificante y las regiones E1, E6, E7 y L1 de todos los tipos. Los cebadores MY11 y MY09 están presentes en la secuencia conservada. Manos et al. y también puede amplificar otros cebadores

2. Reactivos de PCR: Taq ADN polimerasa (2U/ml) y solución madre de dNTP de 10 mmol/L (10 × tampón de PCR para dATP, dCTP, dGTP y dTTP respectivamente). (500 mmol de KCl, 40 mmol/L de MgCl2, 100 mmol/L de Tris-HCl, pH 8,5), 100 μm ol/L de solución madre de my 11 y MY09, agua destilada preparada en un alambique de vidrio esterilizado. Método y procedimiento de amplificación por PCR: utilice 100 μl de solución de reacción de PCR y 0,5 ml de tubo de centrífuga de plástico siliconado estéril como tubo de reacción para la reacción de amplificación.

(1) Prepare los reactivos premezclados antes del experimento y tómelos en alícuotas. Los reactivos premezclados incluyen todos los tipos de reactivos de PCR excepto el ADN de muestra.

(2) Agregue 10 μl de muestra y 90 μl de reactivo premezclado a cada tubo de reacción. -100 μl de aceite de parafina y centrifugar rápidamente en una centrífuga de escritorio durante unos segundos para recoger todos los reactivos de reacción debajo de la capa de aceite. Actualmente, el reactivo de PCR se comercializa y el volumen de reacción es de 25 μL. Solo se puede agregar muestra de ADN. uso

(4) Coloque el tubo de reacción en la máquina de amplificación por PCR. Los parámetros del ciclo son 95 ℃ durante 30 s, 55 ℃ durante 40 s, 72 ℃ durante 50 s y finalmente se extienden a 72 ℃ durante 5 min.

4. Se deben establecer materiales de control de calidad positivos y negativos para cada prueba. Se usaron plásmidos recombinantes que portaban virus del papiloma humano (100 pg/reacción) o ADN de línea celular que contenía virus del papiloma humano (tales como Caski y HeLa) como controles positivos, y se usó ADN de línea celular humana sin virus del papiloma humano como controles negativos.

(3) Detección y análisis de productos de amplificación

1. Electroforesis en gel: después de la reacción de amplificación, retire el tubo de reacción, enfríelo a temperatura ambiente y tome 10 μl de el producto de amplificación utilice gel de poliacrilamida 5-7 o electroforesis de agarosa 1,5, tinción con bromuro de etidio y análisis con analizador UV. Los resultados mostraron que había una banda de ADN obvia con un peso molecular de aproximadamente 450 pb.

2. Hibridación de ácidos nucleicos: si no hay ADN claro en la electroforesis en gel o es necesario determinar la especificidad de la banda de ADN, se puede realizar una transferencia Southern utilizando sondas mixtas públicas marcadas y/o tipo-. Sondas específicas. Hibridación y validación de hibridación puntual.

Según los métodos estándar, las sondas de oligonucleótidos marcadas con 32P ATP deben alcanzar una actividad específica de aproximadamente 107 cpm/pmol. La solución de hibridación debe contener 2×106-5×106cpm sonda/ml.

La hibridación se realizó a 55°C durante 2-3 h, y luego la membrana de hibridación se lavó rápidamente con solución de lavado (2 x SSC, 0,1 SDS) a 30-55°C para eliminar el exceso de sonda. Luego lavar la membrana, y las condiciones varían según las sondas utilizadas: sondas mixtas ordinarias, lavar la membrana a 55°C durante 65438±00min sondas MY12, MY13 y MY16, lavar la membrana a 56-57°C durante 10 min; y lavar nuevamente; sonda MY14 y WD74, a 58-59℃ por 10 minutos, cambiar también el líquido y lavarla una vez.

La detección del virus del papiloma humano mediante PCR es superior a la hibridación de ácidos nucleicos. Su sensibilidad es muy alta. GP-PCR puede analizar directamente los resultados mediante electroforesis en gel y puede detectar 200 copias de ADN del virus del papiloma humano. Si el producto de la PCR se detecta mediante hibridación de ácidos nucleicos, la sensibilidad mejora y se pueden detectar 10 copias del ADN del virus del papiloma humano.

En vista de la alta sensibilidad de la tecnología PCR, tomar células exfoliadas del tracto reproductivo como material de prueba es suficiente para cumplir con los requisitos de la prueba, evitando las engorrosas operaciones de tomar muestras para biopsia y triturar tejido. En general, los productos de amplificación por PCR se pueden diagnosticar directamente mediante electroforesis en gel y observación del ADN resultante. Por tanto, la tecnología PCR es rápida y sencilla para la detección del virus del papiloma humano.

Diagnóstico diferencial

1. Carcinoma genital de células escamosas; más frecuente en personas mayores de 40 años o personas de mediana edad y ancianos. Las lesiones cutáneas se infiltran hacia abajo, aparecen úlceras y hay cambios característicos en la histopatología.

2. Verrugas planas: Son lesiones cutáneas escamosas formadas por la fusión de múltiples pápulas húmedas, más comunes alrededor del ano. Se puede observar Treponema pallidum en las lesiones cutáneas y la prueba sérica de sífilis es positiva.

3. Papulosis peniana perlada: Es una papulosis de color rosa o rojo claro dispuesta a lo largo del surco coronal. La histopatología no mostró células huecas.

4. Pseudocondiloma; las lesiones cutáneas son en su mayoría pápulas rojas ovoides o cambios vellosos limitados a los labios menores, con superficie lisa, prueba blanca de ácido acético negativa y sin células huecas de diagnóstico.

5. Papulosis de Bowen; pápulas pigmentadas o de color marrón rojizo, que histopatológicamente muestran células escamosas atípicas e imágenes de tejido similares al carcinoma in situ.

Prevención

Controlar las enfermedades de transmisión sexual es la mejor manera de prevenir las verrugas genitales. Detectar y tratar a los pacientes y sus parejas sexuales; llevar a cabo educación sanitaria y controlar el comportamiento sexual; los condones pueden prevenir la infección por el virus del papiloma humano y actualmente no existe una vacuna eficaz.