¿Qué hace la HPLC? ¿principio? ¿Cómo hacerlo?
Uso: La cromatografía líquida de alta resolución es más adecuada para la separación y análisis de sustancias con altos puntos de ebullición, mala estabilidad térmica, alta actividad fisiológica y pesos moleculares relativamente grandes. Por lo tanto, se usa ampliamente en. Ácidos nucleicos, polipéptidos, lactonas, análisis policíclicos de hidrocarburos aromáticos, polímeros, fármacos, metabolitos humanos, tensioactivos, antioxidantes, pesticidas, herbicidas y otras sustancias.
Principio: HPLC utiliza líquido como fase móvil y utiliza un sistema de perfusión de alta presión para bombear fases móviles como disolventes individuales de diferentes polaridades o disolventes mixtos y soluciones tampón de diferentes proporciones a una columna cromatográfica equipada con una fase estacionaria. Una vez separados los componentes de la columna, ingresan al detector para su detección, logrando así el análisis y la separación de la muestra.
Método de operación: como se muestra en la figura siguiente, la fase móvil en la piscina de solvente es aspirada por la bomba, mezclada por el controlador de gradiente de acuerdo con un gradiente determinado y luego expulsada. Después de medir su presión y caudal, se introduce la válvula (dispositivo) de inyección, se pasa a través de la columna de protección y la columna de separación y luego se detecta por el detector. Los datos se procesan mediante el equipo de procesamiento de datos o el cromatograma se registra mediante el registrador, las fracciones se recogen mediante el recolector de fracciones y el líquido residual se recoge mediante la botella de líquido residual.
Datos ampliados:
En los inicios de la cromatografía líquida se utilizaban columnas de vidrio de gran diámetro para transportar la fase móvil mediante diferencia de nivel de líquido a temperatura y presión normales, lo que se denominó clásico. cromatografía líquida. Este método tiene una baja eficiencia de columna y lleva mucho tiempo (a menudo varias horas). La cromatografía líquida de alta resolución se desarrolló rápidamente después de la introducción de la teoría de la cromatografía de gases a finales de la década de 1960 sobre la base de la cromatografía líquida clásica. ?
La cromatografía líquida de alta resolución se puede dividir en cromatografía de fase normal y cromatografía de fase inversa según la composición de la fase estacionaria y la fase móvil.
Cromatografía en fase normal
Utiliza una fase estacionaria polar (como polietilenglicol, fases unidas con amino y nitrilo; la fase móvil es un disolvente hidrofóbico relativamente no polar (n-hexano); A menudo se añaden ciclohexano y otros alcanos), etanol, alcohol isopropílico, tetrahidrofurano y cloroformo para ajustar el tiempo de retención de los componentes. Comúnmente utilizado para separar compuestos moderadamente y altamente polares (como fenoles, aminas, carbonilos y aminoácidos).
Cromatografía de fase reversa
Generalmente se utiliza una fase estacionaria no polar (como C18, C8) y la fase móvil es agua o tampón, a menudo añadiendo metanol, acetonitrilo o isopropilo; alcohol. Utilice disolventes orgánicos solubles en agua como acetona y tetrahidrofurano para ajustar el tiempo de retención. Es adecuado para la separación de compuestos no polares y débilmente polares. RPC es el método más utilizado en la cromatografía líquida moderna. Según las estadísticas, representa aproximadamente el 80% de todas las aplicaciones de HPLC.
Materiales de referencia:
Enciclopedia Baidu-Cromatografía líquida de alta resolución