¿Cuáles son las diferencias entre los sustratos cromogénicos DAB, OPD, ABTS y TMBS de ELISA?

La reacción catalítica de la peroxidasa de rábano picante requiere peróxido de hidrógeno (H2O2) y un donante de hidrógeno (DH2). La mayoría de los donadores de hidrógeno son tintes de tina incoloros y la reacción puede producir tintes de oxidación coloreados (D). El proceso de la reacción enzimática es el siguiente:

Hospital Resource Planning (abreviatura de Hospital Resource Planning)

DH2 H2O2————→D 2H2O

Donante de hidrógeno Existen muchas variedades con diferentes características de producto.

El producto de reacción de DAB (3,3-diaminobencidina) es un precipitado insoluble con densidad electrónica, adecuado para tinción inmunoenzimática o observación por microscopía electrónica.

5as (ácido 5-aminosalicílico) se usaba en ELISA en los primeros días, pero su solubilidad no era lo suficientemente alta y era difícil controlar que los pocillos en blanco fueran incoloros. Actualmente se usa raramente.

OT (o-toluidina) se caracteriza por la generación de un producto azul verdoso brillante con alta sensibilidad, pero se ve muy afectado por la temperatura durante la reacción. Dado que el producto es inestable, es necesario que lo sea. medido en poco tiempo.

Actualmente, los donadores de hidrógeno más utilizados y satisfactorios son la OPD (o-fenilendiamina) y el TMB (tetrametilbencidina). El producto del primero es naranja oscuro o marrón, mientras que el producto del segundo es azul verdoso. Ambos tienen buena solubilidad, su color es estable en la oscuridad y pueden ser casi incoloros en el blanco. Se informa que este último es más de 4 veces más sensible que el primero.

Además, existe un donante de hidrógeno llamado ABTS [ácido 2,2'-amino-bis(3-etilbenzotiazolina-6sulfónico)], cuyo producto de reacción es de color azul verdoso y tiene buena sensibilidad y estabilidad. Especialmente en lo que respecta al potencial cancerígeno, tanto ABTS como TMB son dignos donantes de hidrógeno de elección.