¿Cuáles son los pasos principales para transferir genes extraños a un organismo?

1. ¿Obtener genes diana? 2. ¿Formación de moléculas de ADN recombinante? 3. ¿Introducir moléculas de ADN recombinante en las células receptoras? 4. ¿Detectar las células receptoras que contienen el gen diana? 5. Expresión de genes diana

Herramientas: endonucleasa de restricción (que escinde enlaces fosfodiéster), ADN ligasa (que conecta enlaces fosfodiéster), vector (¿maestro? plásmido, ADN de círculo pequeño procariótico)

Obtener el gen objetivo: si se conoce la secuencia, utilice amplificación por PCR o síntesis química; si se desconoce la secuencia, establezca una biblioteca de genes y obtengala de ella;

Formación de moléculas de ADN recombinante: Utilice la misma endonucleasa de restricción para cortar el plásmido y el gen diana para formar los mismos extremos pegajosos, y luego conectarlos con el gen diana.

Introducir moléculas de ADN recombinante en las células receptoras: si el receptor es un animal, utilizar el método de microinyección; si el receptor es una planta, utilizar el método de transformación con Agrobacterium o tubo polínico, si el receptor es un microorganismo, Calcio; método de tratamiento con cloruro (aumenta la permeabilidad de la pared celular).

Examinar las células receptoras que contienen el gen diana: utilice el gen marcador en el vector para realizar la detección.

Expresión del gen objetivo: rasgos a nivel individual, proteínas correspondientes y ARNm a nivel molecular.