¿Cuáles son los pasos principales para transferir genes extraños a un organismo?
Herramientas: endonucleasa de restricción (que escinde enlaces fosfodiéster), ADN ligasa (que conecta enlaces fosfodiéster), vector (¿maestro? plásmido, ADN de círculo pequeño procariótico)
Obtener el gen objetivo: si se conoce la secuencia, utilice amplificación por PCR o síntesis química; si se desconoce la secuencia, establezca una biblioteca de genes y obtengala de ella;
Formación de moléculas de ADN recombinante: Utilice la misma endonucleasa de restricción para cortar el plásmido y el gen diana para formar los mismos extremos pegajosos, y luego conectarlos con el gen diana.
Introducir moléculas de ADN recombinante en las células receptoras: si el receptor es un animal, utilizar el método de microinyección; si el receptor es una planta, utilizar el método de transformación con Agrobacterium o tubo polínico, si el receptor es un microorganismo, Calcio; método de tratamiento con cloruro (aumenta la permeabilidad de la pared celular).
Examinar las células receptoras que contienen el gen diana: utilice el gen marcador en el vector para realizar la detección.
Expresión del gen objetivo: rasgos a nivel individual, proteínas correspondientes y ARNm a nivel molecular.