Prueba para determinación de azúcar por método colorimétrico de antrona

Propósito experimental: Comprender los principios y métodos del método colorimétrico de antrona para medir el azúcar

Principio experimental: La antrona puede reaccionar con grupos de azúcares, grupos de pentosas y azúcares libres o polisacáridos. La solución final se volvió azul verdosa, con una absorción máxima a 620 nm.

3. Instrumentos y reactivos experimentales

Polvo de patata

Pipeta o pipeta regulable

Espectrofotómetro visible (723)

Balanza analítica electrónica

Baño María

Horno eléctrico

Reactivo de antrona: Disolver 2g de antrona en 80H2SO4, y ajustar a 80H2SO4 Permitir. Ajustar el volumen de 80H2SO4 a 1000ml y utilizarlo el mismo día de preparación.

Solución estándar de glucosa (0,1 mg/ml): Disolver 100 mg de glucosa en agua destilada y ajustar el volumen a 1000 ml para su uso posterior.

IV.Operación

1. Dibujar la curva estándar.

Tomar 7 tubos de ensayo secos y limpios, agregar reactivos en el orden de la Tabla 1 y realizar la prueba. medición.

Utilice el valor de absorbancia como ordenada y la concentración (mg/ml) de cada solución estándar como abscisa para dibujar una curva estándar.

Tabla 1 Determinación colorimétrica de glucosa de Antrone - Preparación de curva estándar

Hervir cuidadosamente al baño maría durante 10 minutos, sacar y enfriar con agua corriente, dejar a temperatura ambiente durante 10 minutos, comparar a 620 nm Color

Concentración de glucosa (mg/ml)

2 Determinación

Solución de muestra:

Pesar con precisión. 0,1 g de polvo seco de patata en En el matraz Erlenmeyer -→ Añadir 30 ml de agua hirviendo -→ Colocar en baño maría hirviendo durante 30 min (agitar ocasionalmente) -→ Sacar, centrifugar a 3000 rpm durante 10 min (o filtrar) --→ Lavar repetidamente ( o filtrar) --→ Repetir el residuo Lavar 2 veces--→ Combinar el filtrado--→ Enfriar a temperatura ambiente--→ Concentrar en un matraz Erlenmeyer de 50 ml--→ Sacar 1 ml y concentrar en un matraz volumétrico de 10 ml

Determinación de la solución de muestra:

(1) Tome 4 tubos de ensayo y agregue muestras de acuerdo con la Tabla 2 (la adición de antrona requiere enfriamiento en un baño de agua con hielo durante 5 minutos)

Tabla 2 Determinación colorimétrica de antrona de azúcar - Determinación de la muestra

(2) La muestra añadida se enfría en agua hirviendo durante 10 minutos y se retira el agua corriente. Enfriar y dejar reposar durante 10 minutos y medir el valor de DO de cada tubo de ensayo utilizando colorimetría de 620 nm.

(3) Utilice el tubo de ensayo n.° 1 como tubo de puesta a cero, tome el promedio de los valores de DO de los tubos de ensayo n.° 2, 3 y 4 y calcule el contenido de azúcar correspondiente del solución de muestra de la curva estándar.

3. Cálculo del resultado:

C×V

w = ----×100

m,

En la fórmula, w: la fracción de masa de azúcar ()

C: la fracción de masa de azúcar en la curva estándar. La fracción de masa de azúcar (mg/ml) calculada según la curva estándar

V: El volumen de la muestra diluida (ml)

m: La masa de la muestra (ml) )

Principio

En diferentes etapas del desarrollo individual, las actividades metabólicas de las plantas sufrirán los cambios correspondientes, y el metabolismo de los carbohidratos no es una excepción. Comprender los cambios en el contenido de azúcar soluble tiene un importante valor fisiológico y práctico. Lo que se presenta aquí es el método de colorimetría de antrona. El azúcar genera furfural bajo la acción del ácido sulfúrico, y el furfural reacciona con antrona para formar un complejo verde. La profundidad del color está relacionada con el contenido de azúcar. El método es simple, pero no uniforme, porque la mayoría de los carbohidratos pueden reaccionar con la antrona para producir color.

Instrumentos y fármacos

Balanza analítica para espectrofotómetro modelo 721

Baño María a temperatura constante de mantel

Matraz aforado con vaso de precipitado

Matraz Erlenmeyer, tubo de ensayo grande

Embudo de succión

Éter oxalato de sodio

Acetato de plomo saturado

Solución estándar de glucosa: pesar Medir el cantidad de glucosa cocida en un horno a 80°C hasta peso constante. Pesar 100 mg de glucosa cocida en un horno a 80°C hasta peso constante y preparar una solución de 500 ml, que es una solución estándar que contiene 200 μg de azúcar por ml.

Reactivo de antrona: Pesar 1 gramo de antrona purificada y disolverlo en 1000 ml de ácido sulfúrico diluido. La solución de ácido sulfúrico son 760 ml de ácido sulfúrico concentrado (gravedad específica 1,84) diluidos a 1000 ml.

Pasos de la operación

1. Extracción del azúcar soluble

Pesar unos 5 g de hojas de plantas frescas, triturarlas con cuidado hasta obtener una pasta uniforme en forma de tubo de éter. viértalo en un vaso de precipitados, lave la carcasa con agua caliente a 70 ℃, coloque el material lavado en el vaso de precipitados, luego agregue 30-40 ml de agua evaporada, coloque el vaso de precipitados en un baño de agua y caliéntelo, manteniendo la temperatura a 70-80 ℃ durante aproximadamente media hora, agregue 1 gota a 1 gota de agua mientras se enfría. Después de media hora, enfríe y agregue 1 gota de acetato de plomo neutro saturado para eliminar las proteínas hasta que el acetato de plomo agregado ya no forme un precipitado blanco. Luego verter la mezcla y el residuo lavado en un matraz aforado de 100 ml, agregar agua hasta la marca y agitar bien. Utilice un embudo seco para filtrar el filtrado en un matraz Erlenmeyer seco. Coloque una pequeña cantidad (aproximadamente 0,2-0,4 g) de oxalato de sodio en polvo en la botella para eliminar el exceso de acetato de plomo en el filtrado para precipitar el oxalato de plomo. El filtrado transparente es soluble en extracto de azúcar.

2. Desarrollo del color y colorimetría

Poner 1 ml del extracto de azúcar anterior en un tubo de ensayo limpio y seco, añadir 5 ml de reactivo de antrona, mezclar bien y colocar en un baño maría hirviendo Hervir durante 10 minutos, sacar y enfriar y medir la absorbancia con un espectrofotómetro a una longitud de onda de 625 nm. Calcule el contenido de azúcar en el filtrado a partir de la curva estándar (o calcúlelo usando la fórmula de regresión lineal) y luego calcule el porcentaje de azúcar en la muestra.

3. Dibuja una curva estándar

Toma la solución estándar de glucosa y distribúyela en una serie de soluciones con diferentes concentraciones. Las concentraciones de azúcar por mililitro son 0, 5, 10, 20. , 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 microgramos. Mida la absorbancia según el método anterior y luego dibuje la curva de concentración de azúcar A026 o realice una regresión lineal para encontrar el porcentaje de azúcar en la muestra.

4. Calcular el porcentaje de azúcar en la muestra ()

Sea V el volumen de la muestra de planta diluida (ml)

C es el azúcar contenido del extracto (μg/ml)

W es el peso fresco del tejido vegetal (g)

La fórmula de cálculo es la siguiente: =C×V/(W×1.000.000 )×100