Para mantener la actividad enzimática durante un período de tiempo más prolongado, ¿bajo qué condiciones se deben almacenar varias preparaciones de enzimas?
⑴Almacenamiento a baja temperatura: dado que la mayoría de las proteínas y enzimas son sensibles al calor, generalmente se vuelven inactivas por encima de 35 ℃ ~ 40 ℃. Por lo general, solo se pueden almacenar en el refrigerador durante aproximadamente una semana, y las más puras. La proteína y la enzima, mejor inestable, el estado de solución es más inestable que el estado sólido. Por lo tanto, generalmente se almacena entre -5 ℃ y -20 ℃, y lo ideal es que se pueda almacenar a -70 ℃. Muy pocas enzimas pueden resistir el calor: por ejemplo, la ribonucleasa puede hervirse durante un corto período de tiempo; la tripsina puede resistir 90°C en HCl diluido; la sacarasa puede permanecer inactivada entre 50°C y 60°C durante 15 a 30 minutos. También hay algunas enzimas que son sensibles a las bajas temperaturas. Por ejemplo, la piruvato carboxilasa del hígado de ave es estable a 25 °C y se inactiva a bajas temperaturas. La catalasa debe almacenarse entre 0 °C y 4 °C y se inactiva mediante congelación. se dañará por congelación y descongelación repetidas, inactivación, etc.
⑵ Preparación en polvo seco o cristalización: las proteínas y enzimas son mucho más estables en estado sólido que en solución. Las preparaciones de polvo seco sólido se pueden almacenar en desecantes durante largos períodos de tiempo. Por ejemplo, el polvo seco de glucosa oxidasa se puede almacenar a 0°C durante 2 años y a -15°C durante 8 años. Por lo general, el contenido de agua de las enzimas y proteínas es superior al 10% y se inactivan fácilmente a temperatura ambiente y baja temperatura. Cuando el contenido de agua es inferior al 5%, la actividad disminuirá a 37 °C para inhibir la actividad microbiana. , el contenido de agua debe ser inferior al 10% para inhibir la actividad química. El contenido de agua debe ser inferior al 3%. Además, se debe prestar especial atención al hecho de que las enzimas a menudo se inactivan parcialmente durante la liofilización. _
(3) Conservación bajo agentes protectores: Se ha observado muy tempranamente que la sangre almacenada a temperatura ambiente durante 45 años en condiciones estériles tiene solo un pequeño cambio en la hemoglobina, y muchas enzimas aún conservan actividad parcial. Esto se debe a que existen factores estabilizadores de proteínas en la sangre. Para conservar las proteínas y las enzimas durante mucho tiempo, a menudo se añaden ciertos estabilizadores: por ejemplo: ① Sustancias bioquímicas u orgánicas inertes: como azúcares, ácidos grasos, bovinos. albúmina sérica, aminoácidos, polioles, etc. para mantener un ambiente hidrofóbico estable. ② Sal neutra: algunas proteínas requieren un ambiente polar con alta fuerza iónica (1 mol/L ~ 4 mol/L o solución salina saturada) para mantener la actividad. Los más utilizados son: MgSO4, NaCl, (NH4)SO4, etc. Desalar cuando se utilice. ③Reactivo de sulfhidrilo: algunas proteínas y enzimas contienen grupos de cisteína sulfhidrilo en la superficie o en el interior, que se oxidan fácilmente con el oxígeno del aire a ácido sulfónico o disulfuro y se pueden agregar cisteína o mercaptoetanol durante el almacenamiento. En resumen, se debe prestar suficiente atención a la conservación de las muestras. Para conocer las condiciones de conservación de algunas enzimas de uso común, consulte la tabla "Condiciones de conservación y estabilidad de algunas enzimas" en el libro "Tecnología de preparación bioquímica" (editado por Su). Baxian) Para conocer las condiciones de almacenamiento de otras macromoléculas biológicas y preparaciones biológicas, consulte la literatura y los manuales de enzimología pertinentes.