¿Cómo demostrar que la cepa es genética?
2. Código de cepa
¿Cuál es el código de cepa utilizado en las pruebas microbiológicas nacionales de productos farmacéuticos? ¿CMCC(F) o CMCC(B)? ¿Centro de recolección de recursos de germoplasma médico de China? b representa bacterias y f representa hongos. Staphylococcus aureus CMCC (B) 26003 Escherichia coli CMCC (B) 44102 Bacillus subtilis CMCC (B) 63501 Candida albicans CMCC (F) 98001 Aspergillus niger CMCC (F) 98003 4.3 Pasaje e inoculación 4.3.65438+.
3. Mueva el tubo de cultivo bacteriano liofilizado, el gotero esterilizado de 1 ml, los platos dobles, las pinzas, el medio de cultivo de caldo nutritivo y el agar nutritivo inclinado a la sala de inoculación o al banco de trabajo de purificación.
4. Primero, use una muela para marcar el cuello de la ampolla de cepa liofilizada, luego frote y desinfecte la pared exterior de la ampolla de cepa liofilizada con etanol al 75%, séquela ligeramente. límpielo con algodón con etanol al 75%, colóquelo en el Esterilizar y secar en bandejas dobles. Encienda la lámpara de alcohol, coloque el extremo sellado del tubo de destilación sobre la llama, caliéntelo hasta que quede rojo, use un gotero esterilizado para absorber el medio de cultivo del caldo nutritivo y déjelo caer sobre el extremo sellado caliente del tubo de destilación para apagarlo y reventarlo. .
5. Tome unas pinzas esterilizadas, abra la abertura del tubo agrietado junto a la llama y colóquela en una placa de Petri esterilizada de doble capa. Tome otro gotero esterilizado y colóquelo contra la llama. absorba un poco de caldo nutritivo y agréguelo al fondo del tubo de cepa. Revuelva las bacterias liofilizadas para promover la disolución. Luego succione el líquido bacteriano en el tubo e inocúlelo en el agar nutritivo inclinado y en el caldo común, respectivamente. gotero y tubo de cepa en medio desinfectante, caldo nutritivo inoculado y agar nutritivo inclinado.
6. Colar funcionamiento en canal inclinado
7. El medio de cultivo debe estar recién preparado. Si no hay condensación en la pendiente no lo utilices. La etiqueta muestra el nombre de la cepa y el número de la cepa. La pendiente de cepa extraída del refrigerador debe mantenerse a temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos y luego trasladarse a la sala de inoculación o banco de trabajo limpio después de que se equilibre la temperatura.
8. Encienda la lámpara de alcohol, sostenga la pendiente bacteriana con la mano izquierda, coloque la boquilla cerca de la llama, sostenga el extremo posterior de la varilla de inoculación con la mano derecha, queme el asa de inoculación roja durante 30 minutos. segundos, y luego retirar la parte metálica de la varilla de inoculación. Quemarlo todo al fuego y pasarlo de un lado a otro 3 veces. Gire la boquilla de cauterización sobre la llama con la mano izquierda, sujete el tapón de algodón con el dedo anular, el meñique y la palma de la mano derecha, empuje el tapón de algodón hacia un lado, inserte el asa de inoculación en el tubo humano, apóyelo contra el Coloque una pendiente de agar cerca de la pared y muévala al césped bacteriano después de que se enfríe un poco, raspe una pequeña cantidad de césped bacteriano, luego saque la varilla de inoculación y mueva la boquilla de bacterias hacia la llama.
9. Coloque el tapón de algodón, baje el tubo de inoculación con la mano izquierda, tome 1 pendiente de agar nutritivo, abra el tapón de algodón según la operación anterior, extienda el asa de inoculación dentro del tubo para la parte inferior de la pendiente de agar e inyéctelo suavemente de abajo hacia arriba. Mueva el asa de inoculación a la superficie inclinada para raspar las bacterias de la superficie inclinada.
10. Saque la varilla de inoculación, coloque el tapón de algodón del tubo mediano junto a la llama y luego queme la varilla de inoculación inoculada con bacterias en la llama para esterilizarla.
11. Cultivo y conservación de cepas
12. Cultivo de E. coli a 35~37°C durante 48 horas.
Cultivo de Staphylococcus aureus a 30~35 ℃ durante 48 horas, Bacillus subtilis a 30 ~ 35 ℃ durante 48 horas, Candida albicans a 23 ~ 28 ℃ durante 7 días y Aspergillus niger a 23 ~ 28 Cultivo para 7 días.
13. Saque el tubo de cultivo de la incubadora y guárdelo en el refrigerador (2-8 ℃). La replantación se suele realizar una vez cada dos meses. 4.5 Preparación de la solución bacteriana
14. Tome las bacterias cultivadas mencionadas anteriormente y transfiéralas a la sala de inoculación o al banco de trabajo de purificación. Después de reposar a temperatura ambiente, saque un poco de césped bacteriano del asa de inoculación y colóquelo en caldo nutritivo (10 ml/pieza, esterilizado). Coloque el tubo bacteriano inoculado a una temperatura de 35°C a 37°C durante 18 a 24 horas, luego sáquelo para su uso posterior. Generalmente se puede conservar en el frigorífico durante dos semanas.
15. Tome 1 ml de suspensión bacteriana de caldo nutritivo cultivado (líquido bacteriano concentrado), agregue 9 ml de solución estéril de cloruro de sodio al 0,9%, mezcle uniformemente, que es 10-1, y luego tome otro 1 ml. una pipeta graduada para recoger 10-1 de la solución bacteriana. Cuente en un plato.
16. Esta solución bacteriana diluida se puede utilizar como control positivo después de la prueba y se puede utilizar en el plazo de una semana.
4.7 Registros
17. Después del subcultivo y la inoculación, se deben mantener registros de la inoculación bacteriana. 4.7.2 Después de preparar la suspensión bacteriana, se deben conservar los registros de preparación y uso de la suspensión bacteriana.