Determinación del contenido de paeoniflorina en cápsulas de Xielixiao mediante HPLC
Determinación del contenido de paeoniflorina en cápsulas de Xieselixiao mediante HPLC
Este estudio determinó el contenido de paeoniflorina en el preparado, proporcionando una cierta referencia para mejorar el control de calidad de las cápsulas de Xihelixiao. El siguiente es un documento de muestra compartido por J.L en Literature Network sobre la determinación del contenido de paeoniflorina en cápsulas de Xielixiao mediante HPLC.
Resumen: Objetivo Establecer un método para la determinación de paeoniflorina en cápsulas de Xielixiao. Método Columna cromatográfica: columna Kromasil C18 (4,6 mm? 250 mm, 5 µm); fase móvil: solución de metanol-0,1 ácido fosfórico (25:75); longitud de onda de detección: 230 nm; Resultados: Paeoniflorin tiene una buena relación lineal en el rango de 0,484 4 a 2,422 0 ?g (r = 0,999 9 ). Las ecuaciones de regresión son Y = 190 9276,923 1X ? 99,67 (DDR=2,13). Conclusión El método establecido es preciso, confiable y reproducible, y puede usarse para el control de calidad de paeoniflorina en cápsulas de Xielixiao.
Palabras clave: cápsula de Xielixiao; paeoniflorina; HPLC
La cápsula de Xielixiao está compuesta por doce medicinas tradicionales chinas como Coptis chinensis, raíz de peonía blanca, nuez de betel, Alisma y regaliz. y preparado Tiene los efectos de eliminar el calor y secar la humedad, promover el qi y aliviar el dolor [1]. A menudo se usa clínicamente para el dolor abdominal y la diarrea, malas heces, diarrea, pus y sangre causados por la humedad y el calor. intestino grueso El efecto es notable. En la norma original, solo se midió el contenido de coptis berberina en la preparación, mientras que la peonía blanca nutre la sangre y astringe el yin, y es el ingrediente clave en la prescripción actual, por lo que se considera que la paeoniflorina es el ingrediente activo de la peonía blanca. En este estudio, se determinó el contenido de paeoniflorina en la preparación para proporcionar una cierta referencia para mejorar el control de calidad de las cápsulas de Xielixiao.
1 Instrumentos y reactivos
1.1 Instrumentos Cromatógrafo líquido de alto rendimiento Agilent1100; espectrofotómetro ultravioleta UV1100 (Shanghai Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.); Co., Ltd.); balanza electrónica AB135-S (Mettler Toledo, Suiza);
1.2 La sustancia de referencia del fármaco de prueba paeoniflorina (110736-200424) se adquirió del China Pharmaceutical Biotech Product Testing Institute; Las cápsulas Xiao (Yunnan Baiyao Group Co., Ltd.) se adquirieron en Qingdao Guofeng Pharmacy; el metanol y el ácido fosfórico eran de calidad cromatográfica, el agua era agua purificada y otros reactivos eran de calidad analítica.
2 Métodos y resultados
2.1 Condiciones cromatográficas Columna: Columna Kromasil C18 (4,6 mm? 250 mm, 5 ?m); fase móvil: metanol-0,1 ácido fosfórico (25:75); ); longitud de onda de detección: 230 nm; caudal: 1,0 ml?min-1; El número de placas teóricas no debe ser inferior a 3000 según el pico de paeoniflorina.
2.2 Preparación de la solución
2.2.1 Solución de sustancia de referencia Tome una cantidad adecuada de sustancia de referencia de paeoniflorina, pésela con precisión, agregue metanol para disolverla y prepare una solución que contenga 120 g. por 1 ml, eso es todo.
2.2.2 Para la solución de prueba, tomar el contenido de este producto, triturarlo finamente, tomar aproximadamente 0,5 g, pesarlo con precisión, colocarlo en un matraz cónico con tapa, agregar con precisión 50 mL de metanol, y pesarlo con tratamiento ultrasónico (potencia 300 W, frecuencia 50 kHz) durante 30 minutos, dejar enfriar, pesar nuevamente, compensar el peso perdido con metanol, agitar bien, filtrar, medir con precisión 10 mL del filtrado restante, evaporar a. sequedad y agregar 10 ml de agua al residuo disolver, agitar y extraer con n-butanol saturado con agua 4 veces, 20 ml cada vez, combinar el n-butanol líquido, evaporar hasta sequedad en un baño de agua, agregar metanol al residuo. Residuo para disolver y transferir a un matraz medidor de 10 ml, agregar metanol hasta la marca, agitar bien y filtrar. Pasar y obtener.
2.2.3 Solución de control negativo: Tome los sabores medicinales restantes excepto la raíz de peonía blanca para preparar una preparación en blanco sin raíz de peonía blanca y prepárela de acuerdo con el método de preparación de la solución de prueba.
2.3 Investigación metodológica
2.3.1 Prueba de especificidad Extraiga con precisión 10 µL de cada una de la solución de referencia, la solución de prueba y la solución de control negativo anteriores, y siga las condiciones cromatográficas en 2.1 Tomar una determinación . Como resultado, el pico cromatográfico de paeoniflorina en el producto de prueba pudo lograr la separación inicial y el tiempo de retención fue consistente con la sustancia de referencia correspondiente. La solución de control negativo no tuvo ningún pico de absorción en el mismo tiempo de retención, lo que indica que otros sabores medicinales sí lo habían hecho; no hay interferencia con la determinación de paeoniflorina. Los resultados se muestran en la Figura 1.
2.3.2 Investigación de la relación lineal: tome una cantidad adecuada de sustancia de referencia paeoniflorina, pésela con precisión, agregue metanol para preparar una solución que contenga 242,2 g por 1 ml y mida con precisión 2, 4, 6, 8, y 10 ml. Colocar en matraces medidores de 10 ml, agregar metanol hasta la marca, agitar bien y medir de acuerdo con las condiciones cromatográficas indicadas en 2.1. Tomando la cantidad inyectada de paeoniflorina como abscisa (X) y el área del pico correspondiente como ordenada (Y), dibuje una curva estándar y la ecuación de regresión es: Y = 190 9276,923 1X ? Los resultados muestran que la cantidad inyectada de paeoniflorina tiene una buena relación lineal en el intervalo de 0,484 4 a 2,422 0 µg respectivamente.
2.3.3 Prueba de precisión: extraiga con precisión la solución de referencia según el punto 2.2.1 y mida de acuerdo con las condiciones cromatográficas según el punto 2.1. Repita la medición 6 veces y el volumen de inyección es de 10 litros. Los resultados mostraron que la RSD del área de paeoniflorina fue 1,41 (n=6), lo que indica que la precisión del instrumento fue buena.
2.3.4 Prueba de estabilidad: Tome la solución de prueba anterior y mida el área del pico de paeoniflorina a las 1, 3, 5, 7, 9 y 12 horas después de la preparación. El volumen de inyección es de 10 litros. Los resultados mostraron que la RSD del área del pico de paeoniflorina fue 0,96 (n=6), lo que indica que la solución de prueba tenía buena estabilidad dentro de las 12 horas.
2.3.5 Prueba de repetibilidad: Tomar el contenido del mismo lote de cápsulas de Xielixiao (número de lote 20101004), 6 partes, y preparar la solución de prueba según el método del 2.2.2, de acuerdo con el 2.1. Las condiciones cromatográficas se determinaron según los siguientes elementos y el volumen de inyección fue de 10 µl. Resultados: El contenido promedio de paeoniflorina en la preparación fue de 12,358 3 mg/g y la RSD fue de 1,69 (n=6), lo que indica que la reproducibilidad de este método de determinación del contenido fue ideal.
2.3.6 Prueba de adición y recuperación de muestras: tomar el contenido de la cápsula Xieliixiao con contenido conocido (número de lote 20100401, contenido de paeoniflorina 12,358 3 mg/g), ***6 porciones, cada una de aproximadamente 0,25 g. Pesar con precisión, agregar la solución de referencia de paeoniflorina (0,1205 mg/ml) y 25 ml de metanol respectivamente, pesar y operar el resto según el método indicado en 2.2.2 para preparar la solución de prueba y seguir la cromatografía indicada en 2.1 Medir en las condiciones , inyecte un volumen de muestra de 10 µL y calcule la tasa de recuperación de la muestra.
2.4 Determinación del contenido de la muestra: tomar 3 lotes de muestras y preparar la solución de prueba de acuerdo con el método de preparación de la solución de prueba, y medirla de acuerdo con las condiciones cromatográficas descritas en 2.1. Determinar 3 copias de cada lote de muestras. .
3 Discusión
3.1 Selección del método de preparación del producto de prueba En este estudio, se seleccionó el método de preparación del producto de prueba: tratamiento ultrasónico directo de metanol líquido, inyección de muestra y. medición, interferencia grave de impurezas, raíz de peonía, etc. La separación de los picos cromatográficos de glucósidos no fue ideal, por lo que se utilizó el método de extracción de n-butanol para la eliminación de impurezas [2]. La solución de prueba estaba bien separada.
3.2 Selección de la fase móvil En este estudio, la fase móvil se seleccionó con referencia al método de determinación de paeoniflorina en la Farmacopea y literatura relacionada [3, 4], y finalmente metanol-ácido fosfórico (25: 75), este sistema puede reducir eficazmente las colas de paeoniflorina, lo que da como resultado una buena forma de pico cromatográfico y un tiempo de retención moderado.
Referencias
[1] Comisión Estatal de Farmacopea. Farmacopea China (Parte 1) [S]. Beijing, Chemical Industry Press, 2010: 851.
[ 2] Wang Xiaoyan, Zhu Baozhu, Li Shunji, et al. Determinación del contenido de paeoniflorina en píldoras Xiaoyao mediante RP-HPLC [J], 2008, 21(5): 14-16. >[3] Tang Fuli, Qin Yuwen. Determinación por HPLC del contenido de paeoniflorina en Xiaoyao Mixture [J]. Qilu Pharmaceutical Affairs, 2011, 4: 633-635. Dong, et al. Determinación del contenido de paeoniflorina en gránulos de Fubao mediante cromatografía líquida de alta resolución [J Chinese Pharmaceutical Standards];