En cuanto a cómo demostrar si un nuevo gen es un oncogén o un gen supresor de tumores, ¿puede explicarnos los experimentos diseñados desde varios aspectos? Haré la prueba el viernes.
Creo que, según el pensamiento convencional, no existe una respuesta estándar.
Por ejemplo, en histología, la histoquímica se realiza para ver la expresión del cáncer y los tejidos adyacentes, y luego se realiza una puntuación manual basada en el producto de la intensidad de la tinción y la positividad de la tinción. La puntuación general es de 0 a 12, para que pueda ver intuitivamente si hay una expresión positiva dentro del cáncer y si hay una expresión negativa al lado del cáncer. A través de la histoquímica, puede llegar a la conclusión de que este gen es un oncogén en un determinado tejido tumoral que usted creó, lo que simplemente ilustra un fenómeno;
Luego puede comprar algunos de los tumores que desea crear para líneas celulares. de diferentes fuentes, primero use PCR o WB para detectar la expresión normal de su gen en las líneas celulares, encuentre las líneas celulares con alta expresión del gen objetivo y obtenga el ARNip del gen objetivo para ver si la expresión disminuye. Sería mejor si hubiera líneas celulares con baja expresión del gen diana entre estas líneas celulares, y luego se pudiera realizar la transfección con un plásmido del gen diana para aumentar artificialmente la expresión. Luego use PCR o WB para detectar si la expresión aumenta y los dos métodos anteriores se combinan con el experimento de invasión y el experimento de proliferación. Si las capacidades de invasión y proliferación de las células cancerosas se debilitan después de la interferencia, o si aumentan las capacidades de invasión y proliferación de las células cancerosas con una alta expresión del gen diana, se puede demostrar mediante aspectos positivos y negativos que el gen es un prototipo. oncogén a nivel celular y viceversa.
También puede utilizar células cancerosas normales, ARNip, plásmidos y plásmidos vacíos con alta expresión del gen diana para realizar experimentos de tumorigenicidad en modelos animales, comparar los tamaños de los tumores de cada grupo y realizar análisis estadísticos, y podrá También se puede obtener conclusiones coherentes.