¿Se considera la secuenciación unicelular una investigación de macromoléculas?
¿Qué es la secuenciación unicelular? ¿Cuáles son los métodos tradicionales de investigación científica?
¿Qué es la secuenciación unicelular?
La secuenciación unicelular se refiere a la obtención El material genético de una sola célula. La tecnología de secuenciación se refiere a la adquisición y análisis de secuenciación de alto rendimiento de genes o transcriptomas a nivel de células individuales. Esta tecnología puede revelar la estructura genética única y la expresión genética de cada célula, incluida la variación estructural, la variación genética del número de copias, el nivel de expresión del ARN y otra información relacionada, lo que permite distinguir con precisión diferentes tipos de células y ayuda a los expertos a analizar el nivel celular. Realizar exploración de mecanismos moleculares.
¿Por qué realizar la secuenciación unicelular?
Para los microorganismos multicelulares, durante el proceso de desintegración y división celular, es probable que se produzcan gradualmente diferencias grandes o pequeñas, es decir, diferencias genéticas. Diversidad de materia. Por ejemplo, diferentes células en el mismo tejido tumoral contienen diferentes materiales genéticos, como genes y transcriptomas. En términos de aplicación clínica, estas diferencias pueden afectar el efecto de ciertos tratamientos sobre el tumor maligno.
Los métodos tradicionales de investigación científica se basan en pruebas multicelulares, es decir, se procesan miles de células a la vez. Por ejemplo, cuando los investigadores quieren probar el nivel de expresión de una determinada proteína, métodos comunes como Western Blot, etc., el valor de la señal reflejada es en realidad el nivel de expresión promedio del gen genético en las células de la población, lo que causará diferencias. Faltan datos sobre la diversidad de representaciones entre celdas. Si se utilizan métodos de secuenciación unicelular, como la citometría de flujo, para medir la intensidad de la fluorescencia a nivel de una sola célula, puede reflejar completamente la secuenciación del genoma y el transcriptoma y otros materiales genéticos de diferentes células en la misma población celular.
Métodos completos e hitos de la secuenciación unicelular. En esta etapa, métodos de secuenciación unicelular.
1. Separe las células individuales, cree sus bibliotecas de secuenciación Baidu por separado y luego secuencialas. Las tecnologías típicas que se utilizan actualmente para el aislamiento celular incluyen: tecnología de citometría utilizada principalmente en citometría de flujo de muestras de células y microdisección por captura láser (LCM) utilizada principalmente en muestras de secciones de tejido (Figura 2) [2]. Este método es simple y tosco, pero también tiene las mismas deficiencias obvias: bajo coeficiente de difusión, alta inversión; sin embargo, cuando el número total de células individuales analizadas es relativamente bajo, los resultados de la investigación no pueden reflejar la situación como el número total de; aumenta la cantidad de células analizadas, el costo de la secuenciación también aumentará linealmente.
2. Identificación unicelular basada en código de barras, es decir, asignando una secuencia de ADN única a cada tipo diferente de célula. Durante la secuenciación mixta en las etapas intermedia y posterior, se puede considerar que las moléculas de ácido nucleico con la misma secuencia de codificación de código de barras se originan en la misma célula. Luego, mediante la construcción de una biblioteca de una sola vez, se pueden medir y distinguir los datos de cientos de células individuales. . No hace falta decir que este método tiene mayores ventajas que el anterior.