Resumen de problemas y soluciones de péptidos comunes (1) Lleno de información útil.
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¿Cómo debo manipular y almacenar los péptidos?
Los polipéptidos en forma de polvo liofilizado se pueden transportar de forma estable a temperatura ambiente después de sellarlos y empaquetarlos. Los péptidos disueltos no son adecuados para el almacenamiento a largo plazo.
Guía de almacenamiento de péptidos Antrolex: Los péptidos que requieren almacenamiento a largo plazo deben almacenarse en forma de polvo liofilizado en un recipiente sellado con desecante y almacenarse a -20°C. El efecto es mejor a -80°. C. Bueno, puede evitar al máximo la degradación de los péptidos. Este método de conservación puede conservar los péptidos durante varios años, evitando la degradación y oxidación bacteriana y evitando la formación de estructuras secundarias.
Desembalaje: Equilibrar los péptidos a temperatura ambiente en un desecador antes de desembalarlos y pesarlos. Dado que los péptidos suelen ser higroscópicos, los péptidos que no están equilibrados a temperatura ambiente se condensarán fácilmente después de abrir la tapa, reduciendo así la estabilidad del producto peptídico.
Pesar: Pese rápidamente los péptidos que necesita y almacene los péptidos restantes a -20°C o menos. Los péptidos que contienen cisteína, metionina, triptófano, asparagina, glutamina y glutamato tienen una vida útil más corta en comparación con otros péptidos.
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¿Cómo disolver polipéptidos?
La solubilidad de los péptidos producidos por Antrolex depende en gran medida de la polaridad del péptido. Las proteínas ácidas son solubles en soluciones alcalinas, mientras que las proteínas básicas son solubles en soluciones ácidas. Péptidos hidrófobos y péptidos neutros que contienen una gran cantidad de residuos de aminoácidos no polares o aminoácidos hidrófobos, solubles en una pequeña cantidad de disolventes orgánicos como DMSO, DMF, ácido acético, acetonitrilo, metanol, propanol o isopropanol, y luego agua ( agua destilada) dilución. Los péptidos que contienen metionina o cisteína no se pueden disolver en DMSO porque el DMSO puede causar oxidación de la cadena lateral.
Prueba de disolución de péptidos: Antes de la disolución del péptido, tomar una pequeña porción para la prueba de disolución de péptidos. Deberá probar algunos disolventes diferentes hasta encontrar el que mejor se adapte a sus necesidades. El tratamiento ultrasónico ayuda a romper las partículas y aumenta la solubilidad. (Nota: el tratamiento ultrasónico provocará el calentamiento de la solución y la degradación de los péptidos).
Asigne un valor de -1 a cada aminoácido ácido, incluido el ácido aspártico (d), el ácido glutámico (e) y el terminal carboxilo -. COOH. Cada aminoácido básico tiene un valor de +1, incluida la arginina (R), la lisina (K), la histidina (H) y el amino terminal -NH2. Luego se calcula la carga de todo el polipéptido.
Si la carga de todo el péptido es positiva, el péptido es básico. Intente disolverlo primero en agua destilada; si no es soluble en agua, intente disolverlo con una pequeña cantidad de ácido acético al 10% -25%. Si esto aún no funciona, agregue un poco de TFA (10-50 µl) para disolverlo y luego diluya con agua hasta la concentración deseada.
Si la carga de todo el péptido es negativa, el péptido es ácido. Los péptidos ácidos se pueden disolver en PBS (pH 7,4). Si no es soluble, agregue una pequeña cantidad de solvente alcalino, como bicarbonato de amonio 0,1 M, y luego agregue agua para diluir hasta la concentración deseada. Los péptidos que contienen cisteína libre deben disolverse en tampones ácidos desgasificados porque los grupos sulfhidrilo se oxidarán rápidamente a disulfuros cuando el pH es superior a 7.
Si la carga de todo el péptido es cero, el péptido es neutro. Los péptidos neutros suelen ser solubles en disolventes orgánicos. Primero, Antrolex recomienda intentar agregar una pequeña cantidad de acetonitrilo, metanol o alcohol isopropílico. Para péptidos altamente hidrofóbicos, disuélvalos en una pequeña cantidad de dimetilsulfóxido y luego dilúyalos con agua hasta la concentración deseada. Para los péptidos que contienen cisteína libre, se debe utilizar DMF en lugar de DMSO. Para péptidos con tendencia a agregarse, se puede agregar clorhidrato de guanidina 6 M o urea 8 M, seguido de la dilución necesaria.
Para prevenir o minimizar la degradación de los péptidos, almacene el péptido como un polvo liofilizado a -20 °C, preferiblemente a -80 °C. Si es necesario almacenar los péptidos en solución, es mejor almacenarlos en lugares pequeños. muestras, evite la congelación y descongelación repetidas. Las muestras no utilizadas después de la descongelación deben desecharse. La degradación bacteriana a veces se convierte en un problema para el líquido peptídico, así que disuelva el péptido en agua esterilizada o líquido peptídico y fíltrelo para esterilizarlo.
Aminoácidos básicos: K, R, H, N terminal
Aminoácidos ácidos: D, E, C terminal
Aminoácidos neutros polares: F, Yo, L, M, V, W, y.
Aminoácidos hidrofóbicos no polares: G, A, S, T, C, N, Q, P, acetilo, amido.
Por ejemplo:
rkdefilgasrhd:(+5)+(-4)=+1 se considera un péptido básico.
ekdefilgasehr:(+4)+(-5)=-1 se considera un péptido ácido.
AKDEFILGASEHR:(+4)+(-4) = 0 se considera un péptido neutro.
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¿Se puede predecir si un péptido es soluble?
Antrolex no puede predecir la solubilidad de un polipéptido en agua estudiando su estructura. El grupo ε-amino de la lisina y el grupo guanidina de la arginina suelen ser útiles para predecir la solubilidad, especialmente para péptidos cortos. Por el contrario, los péptidos ácidos que contienen ácido aspártico y ácido glutámico suelen ser insolubles en agua pero solubles en amoníaco diluido o tampones alcalinos.
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¿Cómo elegir la pureza del péptido adecuada para tu investigación?
Antrolex no recomienda el uso de péptidos crudos en experimentos biológicos. Los péptidos crudos pueden contener grandes cantidades de impurezas no peptídicas, como disolventes orgánicos residuales, eliminadores, TFA y otros péptidos incompletos. Los TFA no se pueden eliminar por completo y los péptidos liberados suelen estar en forma de sales de TFA. Si los TFA residuales afectan sus experimentos, recomendamos utilizar otras formas de sal como acetato y clorhidrato. Estas sales suelen ser entre un 20 y un 30 % más caras que las sales tradicionales de TFA. Esto se debe a que se pierden más péptidos durante el proceso de conversión, lo que requiere más materia prima.
Antrolex recomienda los siguientes niveles de pureza de péptidos para una variedad de proyectos:
& gt70 % de pureza de péptidos
Microarrays de péptidos
Como Preparación del antígeno del anticuerpo
Cromatografía
Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas para detectar el título de antisuero
y pureza del péptido gt80%
Transferencia de proteínas ( no cuantitativo)
Péptido sustrato enzimático (no cuantitativo)
Péptido bloqueador (no cuantitativo)
Purificación por afinidad
Fosforilación detección
Aplicación de electroforesis de proteínas e inmunocitoquímica
& pureza de péptidos gt95%
Enzimoinmunoensayo estándar y RIA (cuantitativo)
Interacciones receptor-ligando (cuantitativo)
In vivo e in vitro
Bioensayos
Estudios enzimáticos y experimentos de bloqueo (cuantitativo)
Estudio de resonancia magnética nuclear
Análisis de espectrometría de masas
Otras detecciones cuantitativas
& pureza de péptidos gt98%
Investigación de radar de apertura de síntesis
Ensayos clínicos
API (ingredientes activos de fármacos)
Productos industriales
Investigación con cristales de rayos X
Otros experimentos sensibles : experimentos de interacción, bloqueo y competencia entre enzimas y sustratos, receptores y ligandos.
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¿Cuál es la pureza del polipéptido?
La pureza de un polipéptido se refiere al contenido del polipéptido objetivo detectado por HPLC a 214 nm (214 nm es la longitud de onda de absorción de la cadena peptídica no se puede detectar con un espectrofotómetro UV). Otras impurezas que se pueden encontrar incluyen: secuencias de deleción (secuencias objetivo a las que les faltan uno o más residuos de aminoácidos), secuencias truncadas (secuencias resultantes del proceso de protección) y secuencias de desprotección incompletas (secuencias que faltan durante la síntesis o al final). ). secuencia generada durante el proceso de corte).
La purificación de péptidos no implica agua ni sal. La purificación por HPLC producirá pequeñas cantidades de TFA. Por ejemplo, el extremo amino libre y otras cadenas laterales como Arg, Lys e His producirán pequeñas cantidades de impurezas de TFA. Los péptidos que normalmente suministra Antrolex contienen trazas de TFA y agua residual. Incluso en el estado liofilizado, existirá humedad en diversos grados debido a las diferentes capacidades de unión de * * *.
Las impurezas contenidas en el polipéptido antes de la purificación incluyen polipéptidos y sustancias no polipeptídicas. La mayoría de las impurezas contenidas en el polipéptido purificado son polipéptidos con secuencias modificadas, excepto las sales de TFA.
Secuencia diana en la que se eliminan uno o más residuos de aminoácidos.
Una operación de limitación que evita la creación de secuencias faltantes, lo que puede producir secuencias truncadas.
Producido durante todo el proceso de síntesis o el proceso de escisión final.
El grupo protector se vuelve a unir a otra posición del polipéptido.
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¿Qué es el contenido neto de péptidos?
El contenido neto del péptido es diferente de la pureza del polipéptido. El contenido neto de péptidos se refiere a la cantidad de péptidos en comparación con el material no peptídico (principalmente contraiones y agua). El contenido neto de péptidos puede determinarse mediante análisis de aminoácidos. En general, los péptidos hidrófilos absorberán pequeñas cantidades de agua incluso en estado estrictamente liofilizado. Debido al proceso de purificación y liofilización, el contenido neto de péptidos de diferentes lotes variará.
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¿Qué pasa con los péptidos sintéticos?
A diferencia de la síntesis de proteínas naturales, la dirección de la síntesis artificial es del extremo C al extremo N. La síntesis de péptidos de Antrolex se basa en la plataforma tecnológica PeptideSyn, que es el método Fmoc o t-Boc. La síntesis específica consta de los siguientes ciclos: ① Desprotección: se debe utilizar piperidina para eliminar el grupo protector del grupo amino en la columna y el monómero protegidos con Fmoc. ②Reticulación activada: el activador activa el grupo carboxilo del siguiente aminoácido. Los monómeros activados reaccionan con grupos amino libres, se entrecruzan y forman enlaces peptídicos. ③Ciclo: Repita estas dos reacciones hasta que se complete la síntesis. Luego, el péptido sintetizado se escinde y se desprotege de la resina. Finalmente se realizó precipitación, elución y liofilización.
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¿Qué forma de sal debo utilizar?
Los péptidos normalmente se entregan como sales de TFA. Si los TFA residuales son problemáticos para sus experimentos, le recomendamos utilizar otras formas de sal como acetato y clorhidrato. Estas formas de sal suelen ser entre un 20 y un 30 % más caras que las sales de TFA normales porque la pérdida de péptidos se produce durante la conversión de la sal y se requieren más materias primas.
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¿Cómo comprobar la calidad de los péptidos sintéticos?
La empresa mantiene estrictamente la confidencialidad de toda la información proporcionada por los clientes. Antrolex proporciona resultados de pruebas de HPLC y MS gratuitos al enviar productos. Todos los péptidos de la empresa se purifican mediante cromatografía de fase inversa. El peso molecular del péptido se mide mediante espectrometría de masas para determinar si el producto es correcto. Los resultados de la detección por EM también pueden mostrar la mayoría de las impurezas principales. Si es necesario, también puede proporcionar detección del contenido neto de péptidos, como análisis de aminoácidos o análisis elemental. Estos métodos pueden confirmar la composición de aminoácidos de los péptidos y pueden usarse como métodos complementarios para la confirmación de péptidos. Todos los péptidos entregados tienen la pureza requerida por el cliente. Se descartaron aquellos péptidos que no cumplieron los requisitos de pureza. Por supuesto, también se puede enviar a los clientes si lo necesitan.
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¿La empresa brinda servicios de envasado de péptidos sintéticos?
Si lo solicita, Antrolex puede dividir parte o la totalidad de su pedido en porciones más pequeñas sin cargo. Porque los envases de pequeño volumen pueden evitar la congelación y descongelación repetidas, reducir la cantidad de recipientes que se abren y cierran, reducir la posibilidad de manipulación inadecuada o contaminación bacteriana y hacer que sus péptidos sean más estables.
Todos pueden hacer preguntas. Si tiene alguna pregunta que no esté clara, ¡no dude en contactarnos!