¿Qué métodos pueden lisar E. coli?
El método de lisar bacterias es muy similar al método de lisar células. El siguiente es el método de lisar células:
Método de disrupción celular
1. Puré de tejido a alta velocidad: convierta los materiales en una pasta fina, colóquela en aproximadamente 1/3 del volumen del cilindro, cierre bien la tapa del cilindro, primero ajuste el regulador de velocidad a la posición más lenta, encienda el interruptor y acelere gradualmente hasta la velocidad requerida. Este método es adecuado para tejidos viscerales de animales, semillas carnosas de plantas, etc.
2. Homogeneizador de vidrio para homogeneización: primero coloque el tejido picado en el tubo y luego póngalo en. La varilla de molienda y muela hacia adelante y hacia atrás, moviéndola hacia arriba y hacia abajo. Las células se pueden triturar en pedazos. El grado de destrucción celular en este método es mayor que el de un triturador de tejidos de alta velocidad y es adecuado para pequeños. cantidades y órganos y tejidos animales.
3. Método de tratamiento ultrasónico: use tratamiento ultrasónico con cierta potencia. La suspensión celular se agita rápidamente para romper las células. Este método es principalmente adecuado para materiales microbianos. Se utiliza para preparar varias enzimas. A menudo se utiliza una concentración de 50 a 100 mg de bacterias/ml y el tratamiento se realiza con una frecuencia de 1 kg a 10 kg durante 10 a 15 minutos. Se generará una gran cantidad de calor durante el proceso de tratamiento y se deben tomar las medidas de enfriamiento correspondientes. El tiempo, el tiempo del intervalo ultrasónico y el tiempo ultrasónico se pueden ajustar usted mismo. Una vez completado el ultrasonido, la solución bacteriana debe aclararse. No estoy seguro, puede observarlo bajo un microscopio. El ultrasonido y las proteínas y ácidos nucleicos sensibles al calor deben usarse con precaución.
4. Método de congelación y descongelación repetida: congelar las células por debajo de -20 grados y descongelar. a temperatura ambiente. Repita varias veces debido a la formación de partículas de hielo en las células y el aumento de la concentración de sal en el líquido celular restante provoca hinchazón y rompe la estructura celular.
5. Tratamiento químico: algunos. Las células animales, como las células tumorales, se pueden tratar con dodecilsulfato de sodio (SDS), el colato de sodio desoxigenado y otras membranas celulares están dañadas y la pared celular bacteriana es más espesa y se puede usar para un mejor tratamiento. generalmente 1 mg/ml.
No importa qué método se utilice para romper las células del tejido, provocará que las proteínas intracelulares o las hidrolasas de ácido nucleico se liberen en la solución para biodegradar las macromoléculas, lo que resulta en una reducción en la calidad de la sustancia natural. La adición de fluorofosfato de diisopropilo (DFP) puede inhibir o ralentizar la autolisis; la adición de ácido yodoacético puede inhibir aquellas. El centro activo requiere actividad enzimática proteolítica con un grupo sulfuro. La adición de fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF) también puede eliminar la actividad enzimática proteolítica. todo, y se debe agregar varias veces mientras se rompe, además, también se puede utilizar seleccionar pH, temperatura o fuerza iónica, etc., para que estas condiciones sean las adecuadas para la extracción de la sustancia objetivo.
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