La prueba de actividad de celulasa del suelo no se puede filtrar

La celulosa es uno de los componentes importantes de los carbohidratos que llegan al suelo a partir de residuos vegetales. Bajo la acción de la celulasa, su hidrolizado inicial es la celobiosa, que bajo la acción de la celobiosa se descompone en glucosa. Por tanto, la celulasa es una enzima importante en el ciclo del carbono. El azúcar reductor producido por la hidrólisis enzimática de la celulosa reacciona con el ácido 3,5-dinitrosalicílico para producir ácido 3-amino-5-nitrosalicílico de color naranja. La profundidad del color está relacionada con la cantidad de azúcar reductor, por lo que se puede medir la cantidad de azúcar reductor para expresar la actividad de la sacarasa.

2. Reactivos

1) Tolueno

2) 1 solución de carboximetilcelulosa: 1g de carboximetilcelulosa sódica, disuelta en etanol al 50% hasta 100ml.

3) Tampón acetato de pH 5,5:

Solución de ácido acético 0,2 mol/L 11,55 ml de ácido acético 95 disuelto en 1 L

0,2 mol/L; Se disuelven 16,4 g de C2H3O2Na o 27,22 g de C2H3O2Na.3H2O en 1 litro.

Tomar 11 ml de solución de ácido acético de 0,2 mol/l y 88 ml de solución de acetato de sodio de 0,2 mol/l y mezclar bien para formar acetato de PH 5,5. Buffer. 4) Solución de ácido 3,5-dinitrosalicílico: Pesar 1,25 g de ácido dinitrosalicílico, disolverlo en 50 ml de NaOH 2 mol/L y 125 ml de agua, añadir 75 g de tartrato de potasio y sodio y diluir a 250 ml con agua (la vida útil no es más de 7 cielo). 5) Solución estándar de glucosa (1 mg/mL)

Colocar glucosa pura analítica en un horno a 80°C durante aproximadamente 12 horas antes. Pese con precisión 50 mg de glucosa en un vaso de precipitados, disuélvalos en agua destilada, transfiéralos a un matraz volumétrico de 50 ml, diluya a volumen y agite bien (la vida útil es de aproximadamente una semana a 4°C en el refrigerador). Si la solución se vuelve turbia y floculante, se debe desechar y preparar nuevamente.

3. Pasos de la operación

Curva estándar de glucosa: Pipetear 0, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 ml de solución estándar de glucosa de 1 mg/ml en el tubo de ensayo y luego Agregar agua destilada a 1 mL, agregar 3 ml de solución DNS y mezclar bien, calentar en baño maría hirviendo por 5 minutos, sacar e inmediatamente enfriar a temperatura ambiente en baño maría fría. Usar tubo blanco a cero y. mida el color a una longitud de onda de 540 nm. Utilice el valor de DO como ordenada y la glucosa. Dibuje una curva estándar con la concentración como abscisa.

Pesar 10g de tierra y colocarlo en un erlenmeyer de 50ml, añadir 1,5ml de tolueno, agitar bien y dejar actuar 15min, luego añadir 5ml de solución de 1 carboximetilcelulosa y 5ml de tampón acetato pH5,5, y mezclar. El matraz Erlenmeyer se colocó en una incubadora a 37°C durante 72 horas. Una vez completado el cultivo, filtrar y tomar 1 ml del filtrado y luego realizar la determinación colorimétrica según el método colorimétrico de dibujar una curva estándar. (Para eliminar los errores causados ​​por la sacarosa y la glucosa originales en el suelo, cada muestra de suelo debe controlarse sin matriz y toda la prueba debe controlarse sin suelo; si el valor de absorbancia de la muestra excede el valor máximo del estándar curva, se debe aumentar el múltiplo de fraccionamiento. O reducir la muestra de suelo cultivado)

Cálculo de resultados

La actividad celulasa se expresa en miligramos de glucosa producida por 1g de suelo seco en 72 horas. Actividad celulasa = (una muestra - una sin suelo - una sin matriz) × n/m

Donde: una muestra, una sin tierra, una materia inorgánica representan respectivamente los mg de glucosa calculados a partir del número de la curva estándar ; n es el múltiplo de puntos; m representa el peso del suelo seco.