¿Cómo extraer ADN del bazo de cerdo? ¡Presentamos métodos experimentales!
Tomar bazo de cerdo fresco, eliminar la grasa y la sangre, pesar 10 g, lavar dos veces con solución 1×SSC preenfriada y cortar en trozos.
Prensa: 1×SSC = 1; 5W/V más 50ml 1×SSC preenfriado, usando estructura de alta velocidad.
El machacador tritura 8 veces, 5 segundos cada vez, con un intervalo de 30 segundos.
Poner el homogeneizado en un vaso de precipitados y enfriar en un baño de hielo y sal durante 30 minutos. Centrifugar a 4000 rpm durante 10 minutos. Recoger el sobrenadante. Agregue 2 veces la cantidad de 1×SSC al sedimento, revuelva uniformemente, centrifugue, deseche el sobrenadante y repita dos veces.
El precipitado obtenido se suspendió en 5 veces el volumen de solución PH8.0, 0.1.5 mnacl-0.1 na 2 medta. Agregue 5% de SDS gota a gota mientras agita hasta que la concentración final alcance 65438±0%. Luego agregue cloruro de sodio sólido para llevar la concentración final a 1 mol/L y continúe agitando durante 60 minutos para asegurarse de que el cloruro de sodio se disuelva por completo. Vierta la solución mixta resultante en un matraz Erlenmeyer con tapón esmerilado, agregue un volumen igual de cloroformo-alcohol isoamílico, agite vigorosamente durante 20 minutos, centrifugue a 4000r durante 20 minutos, retire la fase acuosa superior, viértala en un vaso de precipitados. y agregar un volumen igual de cloroformo -Desproteinizar dos veces con alcohol isoamílico.
Saque la fase acuosa del vaso, agregue gradualmente 2 veces de etanol al 95%, revuelva la varilla de vidrio, envuelva la fibra de ADN alrededor de la varilla de vidrio y exprímala, lave la fibra de ADN dos veces con 70 % de etanol, y usar Lavar una vez con etanol al 95% y una vez con éter dietílico, sacar y exprimir.
Los métodos en esta área incluyen la tecnología de interferencia de ARN /zt/rna/, la tecnología de hibridación de ARN, la tecnología de ARN antisentido, etc.