Cómo entender el ciclo de vida de las células cultivadas y la vida útil de las células cultivadas

Período de supervivencia de una generación de células cultivadas

“Una generación” se refiere al tiempo transcurrido desde la inoculación celular hasta la separación y el recultivo. Generar no es lo mismo que duplicar células. En una generación celular, las células pueden duplicarse de 3 a 6 veces y pasar por tres etapas: Proliferación celular

1. Fase latente:

La inoculación pasa por la fase de suspensión (retracción del citoplasma). , el cuerpo celular es esférico) adherente a la pared.

Cultivo de células en cultivo primario durante 10 a 24 horas o más.

Las líneas celulares continuas y las líneas celulares cancerosas se unen después de 10 a 30 minutos.

El fenómeno de la adhesión es muy complejo y se ve afectado por muchos factores.

Afectando la unión celular: La superficie del sustrato no está limpia, lo que afecta la unión celular.

Facilita la unión celular: la superficie del sustrato contiene sustancias positivas y sustancias especiales:

fibronectina (FN),

proteína de superficie celular (cell superficial proteinCSP)

Algunas de estas sustancias existen en la superficie celular y otras provienen del suero.

Características del periodo de incubación:

La duración está relacionada con la densidad y tipo de inoculación celular y la naturaleza del medio de cultivo utilizado.

(1) Una vez que las células se adhieren, entran en el período de latencia y no proliferan. La fase de división es rara y las células tienen actividad de movimiento.

(2) El período de incubación de las células de cultivo primario es de aproximadamente 24 a 96 horas o más, y el período de incubación de líneas celulares continuas y células tumorales es de aproximadamente 6 a 24 horas.

(3) La densidad de inoculación celular es alta y el período de incubación es corto.

(4) Cuando el número de fases de división celular aumenta, indica que las células han entrado en la fase de proliferación exponencial.

2. Fase de crecimiento exponencial (fase de crecimiento logarítmico):

Características: Fase más vigorosa de proliferación celular, con aumento de las fases de división.

Índice de división celular (índice de mitotie MI):

Indica el número de fases de división por cada 1000 células.

Condiciones: El número de fases de división está relacionado con el tipo de célula, los componentes del cultivo y el pH de la temperatura de la incubadora.

Índice de división celular:

Células primarias: entre 0,1% y 0,5%%,

Células en división continua y células tumorales: 3 a 5%.

La fase de crecimiento exponencial es el periodo en el que las células tienen mayor vitalidad, y es la mejor y más importante etapa para realizar experimentos.

La fase de crecimiento exponencial dura de 3 a 5 días. A medida que aumenta el número de células, el espacio de crecimiento se vuelve más pequeño y las células pueden conectarse formando láminas cuando entran en contacto entre sí.

Células normales: El contacto celular puede inhibir el movimiento celular. Este fenómeno se llama inhibición del contacto.

Células tumorales: No existe tal fenómeno, que pueda usarse como uno de los marcadores para distinguir las células normales de las tumorales. Cuando las células tumorales alcanzan una cierta densidad, se desarrollan en un espacio tridimensional, lo que hace que las células se acumulen.

A medida que las células continúan proliferando y dividiéndose, el número de células continúa aumentando, los nutrientes en el medio de cultivo disminuyen y los metabolitos aumentan. Las células se ven afectadas por el agotamiento de nutrientes y metabolitos, lo que resulta en una inhibición de la densidad (Densidad. inhibición), lo que provoca que se detenga la división celular.

3. Fase de estancamiento (fase de estancamiento)

El volumen y la densidad celular alcanzan la saturación y se detiene la proliferación celular. Indica que las células han entrado en la fase de estasis y el número de células permanece constante, también llamada fase de meseta.

Características: Las células no proliferan pero tienen actividad metabólica. Los nutrientes en el medio de cultivo se han ido agotando gradualmente, la acumulación de metabolitos ha aumentado y el pH ha disminuido. En este momento, es necesario pasar, de lo contrario las células se envenenarán, sufrirán cambios morfológicos y las células se caerán. sustrato y muere.