Cultivo primario de células precursoras del adiposo marrón de ratón, cómo aislar células precursoras
(1) Obtenga el búfer de aislamiento de la celda BAT.
Agregar p/s en 1:1000 y almacenar a 4°C.
Nota:
Antes de usar, agregue colagenasa (c5138) al tampón de separación en una proporción de 1 ~ 2 mg/ml, filtre la solución de digestión con un filtro e incube a 37 Precalentar en baño maría ℃.
(2) Pasos: Primero calentar el medio de cultivo (para cultivo, aislamiento y digestión)
1) Remojar ratones recién nacidos en etanol al 70% durante aproximadamente 5 minutos para su desinfección (dos; días después del nacimiento) En unos días)
2) Corte la piel en el medio del hombro, use dos pinzas para separar la piel, use unas pinzas de codo para quitar el BAT (tejido en forma de mariposa entre los omóplatos, tratar de no quitar otro exceso de tejido) y moverlo en un plato de 60 mm que contenga PBS
3) Lavar 2-3 veces con PBS
4) Saca el tejido de murciélago y córtalo en trozos pequeños de 1 mm2 sin líquido.
Colocar el tejido subdividido en 3ml de tampón de separación que contenga colagenasa; digerirlo en un baño de agua a 37°C durante 30 minutos
5) Después de 30 minutos, sacudir vigorosamente el jugo digestivo; para permitir que se adhiera. Las células se dispersan; cuanto más turbio es el líquido, más células se sacuden.
6) Filtrar el jugo digestivo en un tubo de centrífuga de 15ml a través de un tamiz, centrifugar a 200g durante 5 minutos y desechar el sobrenadante.
7) Utilizar tampón de separación (sin colagenasa); Soplar el sedimento en el fondo del tubo de centrífuga, mezclar y centrifugar: 200 g, 5 minutos, descartar el sobrenadante
8) Resuspender las células en 5 ml de medio de cultivo 20 FBS-DMEM, inocular; un plato de cultivo de 60 mm y cultivo, enjuague con medio de cultivo antes de cambiar el medio al día siguiente;
Lo he comido muchas veces y siempre que los ratones nazcan dentro de 2 días, habrá ¡No hay problemas~!