Preparación de lisozima
Esta enzima se encuentra ampliamente en diversos tejidos del cuerpo humano. También se encuentra en las claras de huevos de aves y aves de corral, las lágrimas, la saliva, el plasma, la orina, la leche y otros fluidos corporales y en los microorganismos de. mamíferos Entre ellos La clara de huevo es la más rica. La lisozima extraída de la clara de huevo es una cadena peptídica única compuesta por 18 tipos de 129 residuos de aminoácidos. Es rico en aminoácidos básicos y tiene cuatro pares de enlaces disulfuro para mantener la configuración de la enzima. Es una proteína básica con lisina en el extremo N y leucina en el extremo C. Puede descomponer bacterias Gram positivas, como Micrococcus cellulolyticus, Bacillus megaterium y Aspergillus flavus.
La lisozima está cargada positivamente en un amplio rango de pH por debajo del punto isoeléctrico y puede adsorberse en resinas de intercambio catiónico débilmente ácidas. Después de la elución y la sal, la lisozima se puede precipitar y luego refinar para obtener el producto terminado. Adsorción de clara de huevo ↓ Lavado de resina 724 ↓ Elución de tampón ↓ Solución de sulfato de amonio Salado y diálisis para eliminar la proteína básica ↓ NaOH liofilización lisozima Polvo liofilizado precipitación secado lisozima A 5 ~ 10 ℃, agregue 540 kg de clara de huevo fresca al tratado En 80 kg de resina 724, revuelva y adsorba durante 6 horas, luego déjelo reposar a 0 ~ 5 ℃ durante la noche. Vierta la capa superior de clara de huevo, centrifugue la resina hasta que esté seca y lave repetidamente la proteína de huevo adherida con agua destilada. Luego cargue la resina en la columna y lávela con aproximadamente 150 litros de tampón de fosfato a 0-15 mol/. L, pH = 6 \sim 5. A continuación se eluye la resina con aproximadamente 600 l de solución de sulfato de amonio 10 y se recoge el eluyente. Se añadió sulfato de amonio al eluido de modo que el contenido final de sulfato de amonio fue 40 y se produjo un precipitado blanco. Se dejó en un lugar frío durante la noche. Sifón el sobrenadante, aspira el precipitado y luego usa 1x agua destilada para disolver el precipitado en una pasta fina, luego colócalo en una bolsa de diálisis y dializa con agua destilada a aproximadamente 5°C durante aproximadamente 24 horas, cambiando el agua 2 a 3 veces en el medio. Centrifugar para eliminar el precipitado, lavar el precipitado nuevamente con una pequeña cantidad de agua y combinar el líquido de lavado y el líquido centrífugo. Luego agregue lentamente una solución de hidróxido de sodio de 1 mol/L al dializado mientras agita continuamente para elevar el valor del pH a 8?0~9?0. Si hay un precipitado blanco, retírelo mediante centrifugación. Luego use 3mol/L de ácido clorhídrico para ajustar el pH = 5 a 5?0, liofilizar y obtener lisozima en escamas blancas. También puede usar ácido clorhídrico 3 mol/L para ajustar el pH de la solución de centrífuga a 3–5. Agregue lentamente 5 cloruro de sodio sólido mientras agita, déjelo reposar durante 48 horas a aproximadamente 5 °C, centrifugue y lave el precipitado. con acetona a 0°C. Secar para obtener lisozima.