Notas sobre la electroforesis en gel de agarosa

Las notas son las siguientes:

I. Sistema tampón: En ausencia de iones, la conductividad es muy pequeña y el ADN no migra o lo hace muy lentamente. En los tampones de alta fuerza iónica, la conductividad es muy alta y se genera calor que puede provocar la desnaturalización del ADN, por lo que se debe tener cuidado de utilizar el tampón correctamente. Para períodos prolongados de electroforesis de alto voltaje, es mejor actualizar el buffer con frecuencia o realizar un ciclo del buffer entre tanques.

2. Agarosa: La agarosa de diferentes fabricantes y números de lote tiene diferentes contenidos de impurezas, lo que afectará la migración del ADN y la intensidad del fondo de fluorescencia y debe usarse de forma selectiva.

3. Preparación del gel: el tampón agregado al gel debe ser consistente con el del tanque de electroforesis. El gel disuelto debe verterse en la placa a tiempo para evitar la solidificación antes de verter. Al verter el gel en la placa, evite generar burbujas de aire para no afectar los resultados de la electroforesis.

4. Volumen de muestra: Generalmente, un peine de 0,5 cm de ancho puede agregar 0,5 μg de ADN. El volumen de muestra depende del tamaño del orificio de muestreo, la cantidad de fragmentos en el ADN y el tamaño de. la muestra, demasiado hará que el orificio de muestreo se sobrecargue, provocando colas y dispersión. Este fenómeno es más obvio para el ADN más grande.

V. Los cambios en el sistema de electroforesis afectarán la migración del ADN, siendo necesario añadir un estándar de ADN de referencia para la medición.

VI. La concentración de sal en las muestras de ADN afectará la movilidad del ADN. Para eliminar este efecto, las muestras de control paralelas deben utilizar las mismas condiciones de tampón.

VII.La movilidad del ADN depende de la concentración del gel de agarosa, de la forma y del tamaño de las moléculas migratorias. Se puede resolver una variedad de moléculas de ADN usando geles de diferentes concentraciones. Al preparar gel de agarosa, la concentración del gel se puede determinar en función del rango de moléculas de ADN. Se deben someter a electroforesis pequeños fragmentos de ADN utilizando geles de poliacrilamida para mejorar la resolución.