Introducción a la bilirrubina directa
2 Referencia en inglés DBIL
3 Compruebe el nombre de la bilirrubina directa
4 Clasificación de las pruebas bioquímicas en sangre/determinación de pigmentos
5 Bilirrubina directa Pigmento rojo alias DBIL
6 Descripción general La mayor parte de la bilirrubina en el suero proviene de la hemoglobina producida por la destrucción de los glóbulos rojos envejecidos. Se llama bilirrubina directa después de la glucuronidación en el hígado. La bilirrubina directa también se llama bilirrubina conjugada. La bilirrubina no conjugada se convierte en las células del hígado y se combina con ácido glucurónico para formar bilirrubina conjugada, que reacciona directamente mediante la prueba cualitativa de Vandenberg, por lo que esta bilirrubina se llama bilirrubina directa. Después de combinarse en las células del hígado, la bilirrubina pasa de ser soluble en grasa a soluble en agua y no puede penetrar fácilmente las membranas biológicas. No solo tiene un efecto desintoxicante, sino que también puede excretar bilirrubina del tracto biliar. La medición directa de la bilirrubina se utiliza principalmente para distinguir los tipos de ictericia. El aumento de la bilirrubina combinada indica que la excreción de bilirrubina del tracto biliar se bloquea después del procesamiento y tratamiento de los hepatocitos.
Principio La bilirrubina conjugada en suero puede reaccionar directamente con el reactivo diazo para generar azobilirrubina; en las mismas condiciones, la bilirrubina libre necesita un acelerador para interrumpir la hidrogenación del enlace de bilirrubina y luego reaccionar con el reactivo diazo. La cafeína y el benzoato de sodio actúan como aceleradores y el acetato de sodio puede mantener el pH y tener un efecto acelerador. El ácido ascórbico (o azida sódica) destruye la reacción diazo restante, finaliza la reacción azo combinada con el tubo medidor de bilirrubina y previene la reacción lenta de la bilirrubina libre. La adición de tartrato de sodio alcalino cambia la absorbancia máxima de 530 nm a 598 nm, y la absorbancia producida por la luteína sin bilirrubina y otras luteínas de color marrón rojizo disminuye a insignificante, aumentando la sensibilidad y la especificidad. El color verde final es una mezcla de azobilirrubina básica azul y luteína formada entre cafeína y ácido p-aminobencenosulfónico.
8 Reactivos ① Reactivo de benzoato de sodio con cafeína: Pesar 41,0 g de acetato de sodio anhidro (o 63,0 g de ch 3c oona·3H2O), 38,0 g de benzoato de sodio, etilendiaminotetraacetato disódico (tetraacetato de amina disódica) 0,5 g, disolver en aproximadamente 500 ml de agua destilada, luego agregue 25,0 g de cafeína, revuelva para disolver (no se puede calentar para disolver después de agregar cafeína), complete hasta 6500 con agua destilada. Filtrar con papel de filtro, poner en una botella marrón y almacenar a temperatura ambiente.
②Solución alcalina de tartrato de sodio: Pesar 75,0g de hidróxido de sodio y 263,0g de tartrato de sodio (na 2 C4 H4 o 6·H2O), disolver en agua destilada, ajustar el volumen a 1000 ml y mezclar bien. Colóquelo en una botella de plástico y guárdelo a temperatura ambiente.
③Solución de nitrito de sodio de 5,0 g/L: Pese 5,0 g de nitrito de sodio (nano 2), disuélvalos en agua destilada y diluya a 100 ml, mezcle bien, colóquelo en una botella marrón y guárdelo en el refrigerador para al menos 3 meses. Dilúyelo 10 veces hasta 0,5g/L y mantenlo estable en el frigorífico durante no menos de 2 semanas.
④Solución de ácido p-aminobencenosulfónico de 5,0 g/L: Pesar 5,0 g/L de ácido p-aminobencenosulfónico (NH2C6H4SO3H H2O), disolverlo en 800 ml de agua destilada, añadir 15 ml de ácido clorhídrico concentrado y completar con agua destilada. agua 1000ml.
⑤ Reactivo Diazo: Antes de su uso, mezcle 0,5 ml de solución de nitrito de sodio de 5,0 g/L y 20 ml de solución de ácido p-aminobencenosulfónico de 5,0 g/L.
⑥Solución de azida sódica de 5,0 g/l: pesar 0,5 g de azida sódica, disolverla en agua destilada y diluir a 100 ml.
⑦Solución estándar de bilirrubina
A. Generalmente, la solución estándar se prepara con bilirrubina libre (no unida), por lo que el diluyente para preparar la solución estándar debe contener albúmina. Se puede utilizar albúmina sérica bovina (40 g/l) o suero humano en lugar de albúmina sérica humana. El último método consiste en recolectar suero fresco sin hemólisis, ictericia ni turbidez lipídica, mezclarlo y filtrarlo con un filtro bacteriano si es necesario. Tome 1 ml de suero filtrado, agregue 24 ml de solución salina fisiológica fresca y mezcle bien.
A una longitud de onda de 414 nm y una trayectoria óptica de 1 cm, al ajustar el punto cero con solución salina fisiológica, la absorbancia debe ser inferior a 0,100 y la absorbancia a 460 nm debe ser inferior a 0,04.
B. La bilirrubina en la solución estándar debe cumplir los siguientes estándares: a 25 °C, el diámetro óptico de la solución de cloroformo de bilirrubina pura es de 10 ± 0,01 mm, la longitud de onda es de 453 mm y su molar. el coeficiente de absorción debe estar dentro del rango de 60700±1600; el coeficiente de absorción molar de azobilirrubina medido mediante el método JG mejorado debe ser 74380±866.
C. Solución estándar de almacenamiento de bilirrubina, 171 μm ol/L (10 mg/DL): Pese con precisión 10 mg de bilirrubina calificada, agregue 1 ml de dimetilsulfóxido y revuelva con una varilla de vidrio para preparar la suspensión. Agregue 2 ml de solución de carbonato de sodio de 0,05 mol/L para disolver completamente la bilirrubina, transfiera a un matraz aforado de 100 ml, lave varias veces con suero diluido y combine en el matraz aforado, agregue lentamente 2 ml de ácido clorhídrico de 0,1 mol/L y agite bien. mientras agrega (No use fuerza para evitar crear burbujas). Finalmente completar hasta 100ml con sérum diluido. Proteja de la luz tanto como sea posible durante la preparación y envuelva los recipientes de almacenamiento en papel negro. Es eficaz después de 3 días en un refrigerador a 4°C, pero es necesario preparar una curva estándar lo antes posible después de la preparación.
9 El método de operación se muestra en la Tabla 1.
Después de mezclar bien, ajuste la longitud de onda a 600 nm, ponga a cero el tubo de control y lea la absorbancia de cada tubo; o use agua destilada a cero, lea la absorbancia del tubo de medición y del tubo de control, y utilice el tubo de medición y el tubo de control (AUAC), encuentre la concentración de bilirrubina correspondiente en la curva estándar.
El valor normal de 10 es 0 ~ 6,84 μmol/L.
La importancia clínica de 11 resultados de pruebas aumenta: observado en ictericia hepatocelular, ictericia obstructiva, hiperbilirrubinemia neonatal, síndrome del rotor, hepatitis crónica activa, cirrosis, sepsis, malaria falciparum, quemaduras extensas, hipotiroidismo.
La elevación directa de la bilirrubina es frecuente en la cirrosis biliar primaria y en la obstrucción biliar. La bilirrubina directa puede estar elevada en pacientes con hepatitis y cirrosis.
Referencia de la enfermedad: cuando la bilirrubina total está elevada y la bilirrubina directa está elevada, se sospechan síndromes colestásicos como ictericia obstructiva extrahepática y extrahepática, cáncer de cabeza de páncreas y colangiohepatitis capilar.
12 Nota (1) Requisitos de la muestra: Se deben utilizar muestras de suero para evitar la iluminación de la muestra y la hemólisis, que interferirían con la medición.
(2) Fluctuaciones fisiológicas: cambios de día y de noche 40. La exposición a la luz reduce directamente el almacenamiento de muestras.
(3) Efectos de los medicamentos: fármacos que provocan daño hepático o hemólisis.
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