Contenido de los ensayos destructivos
Los productos de degradación producidos por la potente destrucción de los fármacos suelen determinarse mediante cromatografía. Se deben seleccionar diferentes métodos cromatográficos (HPLC, GC, TLC) o detectores en función de las propiedades físicas y químicas del fármaco y de los posibles productos de degradación. En ocasiones se pueden utilizar sistemas cromatográficos con diferentes mecanismos de separación. Este artículo toma como ejemplo el análisis de productos de degradación mediante cromatografía líquida de alta resolución para ilustrar las cuestiones a las que se debe prestar atención y los problemas existentes en los ensayos destructivos:
Problemas y puntos clave
1. Al seleccionar En condiciones dañinas, el fármaco debería degradarse hasta cierto punto.
Aunque no todas las condiciones destructivas darán lugar a productos de degradación de fármacos, en general pocos compuestos son estables en todas las condiciones de prueba destructivas. Por lo tanto, podemos seleccionar experimentalmente las condiciones apropiadas, como aumentar la concentración de ácidos, bases y oxidación o calentar para degradar fármacos.
Cuando los productos de degradación se miden mediante HPLC, la degradación suele ser de aproximadamente 65438 ± 00 % en función de los componentes principales. Se debe utilizar un método eficaz para detectar productos de degradación y la tasa de recuperación debe ser de alrededor del 90 %, lo que demuestra la eficacia del método de detección.
Para productos de degradación con gran cantidad de degradación en ensayos destructivos, se recomienda consultar la normativa ICH sobre impurezas en nuevos API (máximo diario Cuando la dosis es inferior a 2g, el umbral de identificación es 0,10% cuando la dosis diaria máxima supera los 2 g, el umbral de identificación es del 0,05 %). Si es necesario, se deben realizar análisis cualitativos y utilizar impurezas conocidas para determinar según los datos de seguridad. Cuando no se pueden utilizar impurezas conocidas para comparar, se pueden analizar las diferencias entre los productos de degradación y los componentes principales midiendo sus coeficientes de absorción en la longitud de onda de medición. Si hay una gran diferencia en los coeficientes de absorción entre los dos, se recomienda utilizar el factor de respuesta para un control eficaz después de la corrección. Si la diferencia en los coeficientes de absorción entre ellos es pequeña, se recomienda utilizar el método de autocontrol o el método de normalización del área de pico para un control eficaz.
Los fármacos generalmente se degradan en pequeñas moléculas durante las pruebas destructivas, pero algunos se polimerizan para formar polímeros, como los fármacos antibacterianos β-lactámicos. Los polímeros pueden producirse a altas temperaturas o alta humedad y deben usarse como método eficaz para ello. detección.
Los principales problemas a este respecto son: (1) el fármaco principal se degrada completamente y los productos de degradación no se pueden detectar eficazmente (2) debido a que las condiciones de degradación seleccionadas no son lo suficientemente fuertes, el fármaco no se puede detectar; degradado y se piensa erróneamente que el fármaco es estable (3) No se puede seleccionar un método de medición apropiado para medir los productos de degradación, lo que resulta en una baja tasa de recuperación después de la degradación de los componentes principales; no considerado; (5) La fase móvil cromatográfica seleccionada es inapropiada y el cromatograma muestra que hay picos de interferencia.
2. Análisis de resolución y pureza máxima
El número de productos de degradación producidos por las pruebas destructivas es relativamente grande. Cuando se utiliza el método HPLC para la determinación, es necesario considerar la separación entre el componente principal y los productos de degradación, y entre los productos de degradación, para garantizar una buena separación entre el pico del producto de degradación, el pico principal y el pico del producto de degradación. Además, para las materias primas, si la separación cumple con los requisitos, también se debe considerar si el fármaco principal tiene una buena separación de los materiales de partida y los intermedios sintéticos para las preparaciones, se debe prestar atención a la interferencia de los excipientes y los productos de degradación de los excipientes; La determinación de las condiciones cromatográficas suele basarse en los requisitos de separación de los dos productos más difíciles de degradar o de los productos de degradación y los componentes principales. En vista de los requisitos de alta resolución para la detección de productos de degradación, se recomienda la elución en gradiente para el análisis cromatográfico para separar eficazmente los productos de degradación.
Estrechamente relacionado con la resolución está el análisis de pureza máxima.
Para detectar la pureza de los picos, generalmente se utiliza un detector de matriz de diodos o tecnología LC-MS para determinar la pureza de cada pico cromatográfico, indicando si hay otros picos en el pico principal y en cada pico del producto de degradación. No es convincente juzgar la pureza de un pico simplemente observando su forma. Para las pruebas destructivas de fármacos innovadores, el análisis de pureza máxima es muy importante. En primer lugar, se pueden comprender las características de los productos de degradación; en segundo lugar, se pueden detectar y controlar eficazmente las impurezas. Los principales problemas son: (1) Hay picos obvios del producto de degradación en el pico principal y el método de determinación no es factible (2) Es un fenómeno común que la pureza del pico no se pueda analizar de manera efectiva; En este caso, es imposible determinar si el pico principal contiene un pico de producto de degradación. (3) Para las preparaciones, no se considera la interferencia de la degradación de los excipientes en los resultados de la medición;
3. Consideración de la sensibilidad de detección
Para los productos de degradación producidos por ensayos destructivos, generalmente se considera cambiar la longitud de onda de medición para analizar y detectar el número de picos y el contenido de los productos de degradación. para determinar condiciones y métodos de detección razonables. Esta es también una de las bases importantes para determinar la longitud de onda de medición. Si es necesario, se pueden utilizar sistemas cromatográficos con diferentes mecanismos para detectar productos de degradación. En principio, el método de detección de impurezas seleccionado debería poder determinar cada producto de degradación del fármaco en pruebas destructivas (teniendo en cuenta también la detección de los materiales de partida y cada intermedio de síntesis), controlando así los productos de degradación. Garantizar tasas de recuperación adecuadas. El principal problema encontrado en la revisión actual es que solo se proporciona el límite de detección del componente principal, y el límite de detección del componente principal se utiliza como base para determinar la longitud de onda de medición, mientras que la detección de algunos productos de degradación (incluido el inicio materiales e intermedios) se ignora, lo que finalmente se refleja en el hecho de que la tasa de recuperación de la degradación no puede cumplir con ciertos requisitos, solo se degrada el fármaco y no se detectan productos de degradación.
Comprender plenamente la importancia de las pruebas destructivas en el establecimiento de métodos de detección de impurezas y establecer métodos científicos y razonables de detección de impurezas desempeña un papel importante para garantizar la seguridad de los medicamentos clínicos.
La prueba de degradación forzada se refiere a una serie de pruebas para examinar la estabilidad de materias primas o preparados en duras condiciones de prueba. En general, el propósito de este experimento tiene principalmente los dos aspectos siguientes: primero, al examinar la estabilidad del fármaco en una serie de condiciones duras, podemos comprender las características de estabilidad intrínsecas del fármaco, sus vías de degradación y sus productos de degradación. Por ejemplo, mediante pruebas de degradación a alta temperatura podemos saber si el fármaco investigado es estable a altas temperaturas, si es inestable, en qué condiciones, por qué vías de degradación y qué productos de degradación se obtienen; En segundo lugar, estas pruebas también pueden verificar hasta cierto punto la especificidad de los métodos de análisis de sustancias pertinentes para controlar los productos de degradación.
En cuanto a los fármacos innovadores, no sabemos lo suficiente sobre sus propiedades. Por lo tanto, al diseñar una prueba de degradación forzada relativamente completa, se pueden comprender completamente sus características de estabilidad, proporcionando así una referencia útil para la fórmula, el diseño de procesos y la determinación de las condiciones de almacenamiento del producto. Por lo tanto, para los fármacos innovadores, es particularmente importante comprender las características de estabilidad del fármaco mediante pruebas de degradación forzada. Para los medicamentos genéricos, si hay suficiente literatura para describir completamente las características de estabilidad, las vías de degradación y los productos de degradación del medicamento, no hay necesidad de comprender repetidamente este conocimiento previo mediante pruebas de degradación forzada. En este momento, el propósito de la prueba de degradación forzada es principalmente verificar la especificidad del método de análisis del producto de degradación. Además, dado que generalmente no existen estudios cualitativos sobre sustancias relevantes en China y no existen estándares de referencia de impurezas correspondientes, es difícil utilizar estándares de referencia de impurezas para verificar la especificidad y el límite de detección del método al verificar los métodos analíticos para sustancias relevantes. Por lo tanto, como complemento a la verificación de los métodos analíticos para las sustancias pertinentes, al formular directrices pertinentes, mi país exige pruebas de degradación forzada necesarias de las materias primas y preparados para examinar la confiabilidad de los métodos analíticos.
De acuerdo con el propósito de la prueba de degradación forzada, la prueba generalmente debe examinar la estabilidad del fármaco bajo la influencia de ácidos, álcalis, altas temperaturas, luz intensa, oxidación y otros factores. Para los API sólidos, normalmente es necesario examinar la estabilidad del API en estado sólido y en solución, respectivamente. Además, para comprender completamente las características de estabilidad y las vías de degradación del fármaco, se puede realizar una prueba de degradación forzada basada en los factores anteriores. Por ejemplo, la estabilidad de las soluciones de muestra a altas temperaturas o luz intensa se puede estudiar en condiciones neutras, ácidas o alcalinas.
A la hora de diseñar las condiciones de prueba específicas para cada proyecto, se deben considerar de forma integral la forma farmacéutica y las condiciones de proceso del fármaco. Siempre que se logre el propósito de la prueba de degradación forzada, las condiciones de prueba seleccionadas son razonables. Dado que la estructura química, la forma farmacéutica y las condiciones de proceso de cada fármaco son diferentes, es difícil proponer condiciones de prueba unificadas. Las siguientes condiciones de prueba de degradación son solo para su referencia:
1. Prueba de degradación ácida
Generalmente, se selecciona ácido clorhídrico 0,1 N para la investigación a temperatura ambiente o en condiciones de calefacción.
La concentración de la solución ácida, la temperatura y el tiempo de inspección se pueden determinar de manera flexible según las especies específicas y las pruebas preliminares.
2. Prueba de degradación de álcalis
Generalmente, se selecciona una solución de hidróxido de sodio 0,1 N para la investigación a temperatura ambiente o en condiciones de calefacción. La concentración de solución alcalina, la temperatura de inspección y el tiempo se pueden determinar de manera flexible según variedades específicas y pruebas preliminares.
3. Prueba de degradación a alta temperatura
Se puede probar en estado sólido y en solución respectivamente. La temperatura y el tiempo de prueba específicos se pueden determinar de manera flexible según la variedad específica y según. experimentos preliminares. Por ejemplo, se puede inspeccionar a 60 y 80°C durante 30 días, o a 130°C durante 8 horas.
4. Prueba de fotodegradación
Se puede probar en estado sólido y en solución respectivamente. La intensidad de la luz específica y el tiempo de prueba se pueden determinar de manera flexible en función de la variedad específica y de forma preliminar. experimentos. Por ejemplo, según la directriz Q1B del ICH, se puede realizar un estudio de dos ciclos: primero con una lámpara fluorescente blanca fría de 1,2 millones de lux (Lx) × hora y luego con una lámpara fluorescente ultravioleta de 200 Wh/m2.
5. Prueba de degradación oxidativa
La investigación se realiza principalmente en estado de solución. El oxidante puede ser oxígeno saturado o peróxido de hidrógeno de diferentes concentraciones, y se realiza a temperatura ambiente. o en condiciones de calefacción respectivamente.
Al final de la prueba mencionada anteriormente, según el propósito y los resultados de la prueba, se llega a una conclusión clara: si las características de estabilidad, las vías de degradación y los productos de degradación del fármaco en diversas condiciones pueden analizarse utilizando sustancias relevantes. Métodos para comprobar si hay productos de degradación.