Preparación de tampón fosfato
El tampón fosfato es un reactivo de experimentos bioquímicos de uso común, que se utiliza para ajustar el valor del pH de la solución. El tampón de fosfato puede estabilizar la actividad celular y enzimática en experimentos biológicos, lo que permite realizar experimentos en condiciones de pH adecuadas. El siguiente es un método comúnmente utilizado para preparar tampón fosfato:
Materiales:
Dihidrogenofosfato (NaH2PO4)
Hidrogenofosfato disódico (Na2HPO4)
Agua destilada (o agua desionizada)
Hidróxido de sodio (NaOH) o ácido clorhídrico (HCl) (utilizado para ajustar el pH según las necesidades experimentales)
= Pasos:
Preparar solución de dihidrógeno fosfato 0,2 M: pesar 27,6 g de NaH2PO4, agregar la cantidad adecuada de agua destilada para disolver y diluir a 1000 ml. Mezclar bien.
Preparar solución de hidrogenofosfato disódico 0,2 M: pesar 28,4 g de Na2HPO4, añadir la cantidad adecuada de agua destilada para disolver y diluir hasta 1000 mL. Mezclar bien.
Según el valor de pH del tampón requerido, calcule la proporción de volumen requerida según la fórmula del tampón. A continuación se toma como ejemplo la preparación de un tampón de pH 7,4:
Para un tampón de pH 7,4, se pueden utilizar dihidrógenofosfato e hidrógenofosfato disódico para prepararlo en diferentes proporciones.
Normalmente se puede utilizar la siguiente fórmula: 9 mL de solución de hidrogenofosfato disódico + 91 mL de solución de hidrogenofosfato disódico.
Por supuesto, la proporción de volumen se puede ajustar según las necesidades reales.
Saque los volúmenes necesarios de solución de hidrogenofosfato disódico y de solución de dihidrógenofosfato y viértalos en un recipiente limpio.
Utiliza una solución diluida de hidróxido de sodio (NaOH) o ácido clorhídrico (HCl) y agrégala gota a gota al tampón mientras mides el pH de la solución con un medidor de pH hasta alcanzar el pH deseado.
Remueve la solución para mezclarla bien y de manera uniforme.
Finalmente, utilice agua destilada o desionizada para diluir la solución hasta el volumen requerido y revuelva uniformemente.
Notas:
Preste atención a la seguridad del laboratorio y use equipo de protección personal durante la operación.
Al ajustar el valor de pH, tenga cuidado, agregue solución alcalina (NaOH) o solución ácida (HCl) gota a gota y mida el valor de pH repetidamente para evitar exceder el valor de pH objetivo.
La solución tampón de fosfato preparada debe almacenarse en el frigorífico o cámara fría para evitar la exposición a la luz solar o altas temperaturas para mantener su estabilidad.
Lo anterior es un método de preparación de tampón fosfato de uso común. La proporción de preparación específica y el valor de pH se pueden ajustar según las necesidades experimentales. Cuando utilice tampones en experimentos, debe leer atentamente el manual experimental y utilizarlos adecuadamente de acuerdo con los requisitos experimentales.