Análisis de fármacos: método de escaneo en capa fina de preparaciones de medicina tradicional china
Selección de las condiciones del ensayo
Condiciones de cromatografía en capa fina: En principio, los componentes deben estar completamente separados, y las manchas deben ser simétricas, uniformes y sin colas.
(2) Método de detección: método de absorción y método de fluorescencia. Los componentes que absorben en las regiones visible y ultravioleta pueden determinarse mediante mediciones de absorción en el rango de 200 a 800 nm. Para componentes que son fluorescentes, se puede seleccionar la longitud de onda de excitación (λex) y la longitud de onda de emisión (λem). El método de fluorescencia tiene las características de gran especificidad, alta sensibilidad y amplio rango lineal.
(3)Método de medición: hay dos métodos: método de reflexión y método de transmisión. El método de reflexión consiste en irradiar un haz de luz sobre un punto delgado y medir la intensidad de la luz reflejada. La sensibilidad de la luz reflejada es muy baja, no se ve afectada por el grosor de la capa delgada, la línea de base es estable y la relación señal-ruido es alta, por lo que se utiliza ampliamente. El método de transmisión se ve muy afectado por el espesor de la capa delgada y el vidrio absorbe la luz ultravioleta, por lo que rara vez se usa en la práctica.
(4) Modo de escaneo: Hay dos tipos: longitud de onda única y longitud de onda dual. La longitud de onda dual son dos haces de luz con diferentes longitudes de onda. Un haz se llama longitud de onda de medición (λs) para medir la muestra y el otro haz se utiliza como control y se llama longitud de onda de referencia (λR). Se iluminan alternativamente dos haces de luz in situ a través de un interruptor y se cuantifica la diferencia de absorbancia δA. Las longitudes de onda duales pueden eliminar los efectos de las faltas de homogeneidad de las capas finas y estabilizar la línea de base. Normalmente, la longitud de onda de medición es la longitud de onda de absorción del componente de medición, y se puede seleccionar una longitud de onda de referencia cuando el componente no tiene absorción. Si el espectro de fondo está en el mismo punto de absorción que λS, se puede lograr el propósito de eliminar la interferencia de fondo. Los métodos de longitud de onda única generalmente se determinan mediante espectroscopia de absorción de manchas.
También hay escaneo lineal y escaneo en diente de sierra: el escaneo lineal es un escaneo unidireccional, el haz es ligeramente más largo que el punto y la velocidad es rápida, pero el error es mayor cuando la forma del punto es irregular o la concentración es desigual y se utiliza principalmente para medir la fluorescencia. El escaneo Sawtooth utiliza un pequeño haz de luz para escanear en dos direcciones mutuamente perpendiculares simultáneamente. Dado que el haz es pequeño (1,25 mm x 1,25 mm), la diferencia de concentración dentro del haz se puede ignorar, por lo que se ve menos afectada por la forma del punto y la distribución de la concentración. [Recopilado por Medical Education Network]
(5) Parámetro de dispersión SX: dado que la capa delgada dispersa la luz, su absorción a y su concentración KX no obedecen la ley de Beer, pero cumplen con la ecuación K-M, y su absorción se reduce dispersando Small. La curva de A-KX se desvía del eje horizontal y no es una línea recta. Su forma está relacionada con SX. Por conveniencia de determinación. El escáner de capa fina está equipado con un linealizador para corregir la curva de trabajo y convertirla en una línea recta. Por lo tanto, es necesario ingresar el valor del parámetro de dispersión SX durante la medición. Se conocen los valores SX de muchos laminados finos. Si se desconoce, se puede juzgar en función de los resultados de la corrección (imagen).
Selección del método de medición
Método estándar externo: si la curva estándar pasa por el origen, se puede corregir mediante el método de un punto si no pasa por el origen, Si es necesario, se puede utilizar el método de corrección de dos puntos y el método de corrección multipunto. Durante la medición, la solución de prueba y la solución de referencia deben cruzarse en la misma placa delgada. Debe haber al menos 4 soluciones de prueba y al menos 2 soluciones de control de cada concentración.
Método del estándar interno: El método del estándar interno consiste en añadir el estándar interno a la solución de prueba y a la solución de referencia, y utilizar la relación de sus áreas de pico como base cuantitativa. Actualmente raramente usado.
Hay muchos factores que afectan las precauciones. Se debe prestar atención a los siguientes puntos al medir: el espesor de la capa delgada debe ser uniforme, la superficie debe ser lisa y se deben usar tableros prefabricados; el muestreo debe ser preciso y el tamaño del área de producción debe ser consistente; el revelador debe rociarse uniformemente, usar una cantidad moderada y asegurarlo con cinta adhesiva;
Este método tiene un rango lineal estrecho y debe medirse dentro de su rango lineal.
Hay 17 tipos de materiales y preparaciones medicinales en la "Farmacopea China" (edición 95), y este método se utiliza para determinar el contenido.
Ejemplo Determinación del contenido de ginsenósidos en pastillas de Naodesheng.
Pesar con precisión 2 g de la muestra de prueba, colocarla en un extractor Soxhlet para eliminar las impurezas solubles en grasa, luego usar metanol a reflujo continuo para extraer los ginsenósidos, evaporar el metanol, disolver el residuo en agua y extraer. y purificar con n-butanol. Recuperar n-butanol a presión reducida y disolver el residuo en metanol como solución de prueba. Tomar ginsenósido Rg1 como sustancia de referencia, agregar metanol para preparar una solución que contenga 0,5 mg por ml y utilizarla como sustancia de referencia. la solución de referencia. Tome 2 ~ 4 μl de la solución de prueba y 2 μl de la solución de referencia respectivamente y colóquelos en la placa de capa fina de gel de sílice G de alta eficiencia. Utilice cloroformo-acetato de etilo-metanol-agua (15:40:22:10) 5. ~10℃ como agente de expansión. Rocíe una solución de etanol de ácido sulfúrico al 10%, caliente a 110 °C hasta que el color directo sea claro, sáquelo, cubra la placa de TLC con una placa de vidrio del mismo tamaño, fíjela con cinta adhesiva y mida de acuerdo con el escaneo de capa delgada. método, longitud de onda: λS = 525 nm, λR = 700 nm, medir el valor de absorbancia integrado de la muestra problema y la sustancia de referencia, y calcular. [Recopilado por Medical Education Network]
Este método utiliza un método de corrección de dos puntos. La curva estándar se puede procesar mediante regresión lineal usando una calculadora o calcularse usando la siguiente fórmula, porque m = a Ba, b. = (m1-m2 )/(A1-A2), a = m1-bA1.
Cromatografía líquida de alto rendimiento
Tiene una alta eficiencia de separación, una rápida velocidad de análisis, un amplio rango de aplicaciones y su precisión y linealidad son mejores que el método de escaneo de capa fina. Es un método seleccionado manualmente para determinar el contenido de preparaciones de medicina tradicional china. El contenido de 12 materiales y preparaciones medicinales en la primera edición de 1995 se determinó mediante cromatografía líquida de alta resolución, y existe una tendencia creciente.
Selección de las condiciones cromatográficas
Se utiliza ampliamente la cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa (RP-HPLC) y las fases estacionarias no polares, entre las que se encuentra el gel de sílice unido con octadecilo (ODS). utilizado El más extenso. La fase móvil es un disolvente mixto de metanol-agua o acetonitrilo-agua. Al utilizar la cromatografía de fase inversa, los componentes que interfieren, como los aditivos polares en la preparación, fluyen primero y no permanecerán en la columna cromatográfica para contaminarla. Como ingredientes ácidos, como salvia miltiorrhiza, baicalina, ácido glicirrícico, etc. Durante la separación, se puede agregar una cantidad adecuada de ácido, como ácido acético y ácido fosfórico, a la fase móvil para inhibir su disociación; para componentes fuertemente ácidos, también se puede usar cromatografía de pares iónicos. El reactivo contraión comúnmente utilizado es el hidróxido de tetrabutilo. .amonio. Para componentes básicos, como berberina y efedrina, a menudo se usa cromatografía de pares iónicos de fase inversa con un alquilsulfonato agregado a la fase móvil ácida. Los aniones inorgánicos, como los fosfatos, también se pueden utilizar como contraiones de ácidos orgánicos. Generalmente se utilizan detectores UV, que son sensibles y estables.