¿Puedes decirme cómo preparar un medio de peptona con extracto de carne?
3g de extracto de vacuno
10g de peptona
5g de cloruro sódico
Agar 15 -20 gramos
Agua 1000 ml
H7.4-7.6
Tres tipos de equipos
1mol/L Cloruro sódico, Agar . Instrumentos
Extracto de carne, peptona, NaCl, agar;
1 mol/L NaOH, 1 mol/L HCl;
Tubos de ensayo, matraces Erlenmeyer, vasos de precipitados, medidores. cilindros, varilla de vidrio, dosificador, balanza de torsión, yokan, olla a presión, papel pH (pH 5,5-9,0), algodón, papel kraft y otros materiales. Algodón, papel kraft, rotuladores, cuerda de cáñamo, gasas, etc.
IV.Pasos de la operación
1. Pesar
Pesar con precisión el extracto de carne, la peptona y el NaCl en un vaso de precipitados según la proporción de la fórmula del medio de cultivo. La pasta de carne generalmente se recoge con una varilla de vidrio, se pesa en un vaso pequeño o de reloj, se disuelve en agua caliente y se vierte en el vaso. También puede poner la pasta de carne en el papel de pesar y ponerla directamente en el agua después de pesarla. Si la calienta un poco, la pasta de carne se separará del papel de pesar y luego retire el papel de pesar. La peptona absorbe la humedad muy fácilmente y debe pesarse rápidamente. Además, al pesar medicamentos, evite mezclar medicamentos. Use una cuchara de esquina para pesar un tipo de medicamento, lávelo y séquelo y luego pese otro medicamento. La tapa del frasco no se puede confundir.
2. Disolución
En el vaso de precipitados anterior se puede primero añadir menos cantidad de agua de la especificada, remover con una varilla de vidrio y luego colocarlo sobre una malla de amianto y calentar. para disolverse. Después de que el medicamento se haya disuelto por completo, agregue agua hasta el volumen total requerido. Si está preparando un medio de cultivo sólido, coloque el agar pesado en el medicamento disuelto y luego caliéntelo y disuélvalo. Durante el proceso de disolución del agar, debe revolver continuamente para evitar que se rompa el fondo del vaso de pasta de agar. Finalmente reponer el agua perdida.
3. Ajuste el valor de pH
Antes de ajustar el valor de pH, utilice un papel de prueba de pH de precisión para medir el valor de pH original del medio de cultivo. use un gotero para inyectar un poco de agua en el medio de cultivo. Agregue 1 mol/L de NaOH gota a gota a la solución, revuelva mientras agrega y mida el valor de pH con papel de prueba de pH en cualquier momento hasta que el valor de pH alcance 7,6. En lugar de ajustar con 1 mol/L de HCl. Tenga cuidado de no ajustar el valor del pH demasiado alto para evitar el ajuste, de lo contrario afectará la concentración de cada ion en el medio de cultivo.
Para algunos microorganismos que requieren un valor de pH más preciso, se puede utilizar un acidómetro para ajustar el pH (consulte las instrucciones de uso correspondientes).
4. Filtración
Filtrar con papel de filtro o gasa multicapa en caliente para facilitar la observación de los resultados. Generalmente, no existen requisitos especiales y este paso se puede omitir (no se requiere filtración para este experimento).
5. Dispensación
Según los requisitos experimentales, el medio de cultivo preparado se puede distribuir en tubos de ensayo o matraces Erlenmeyer. El dispositivo dispensador se muestra en la Figura 5-1.
Durante el proceso de dosificación, tenga cuidado de no dejar que el medio de cultivo entre en contacto con la boca del tubo de ensayo o del frasco para evitar contaminar el tapón de algodón y provocar contaminación.
(1) La altura adecuada para dispensar líquido es aproximadamente 1/4 de la altura del tubo de ensayo.
(2) El sólido se divide en tubos de ensayo y el volumen de llenado no debe exceder 1/5 de la altura del tubo de ensayo. Debe formarse una pendiente después de la esterilización, como se muestra en la Figura. 5-2. El volumen de llenado del matraz Erlenmeyer no debe exceder la mitad del volumen del matraz Erlenmeyer.
(3) Los tubos de ensayo semisólidos en alícuotas generalmente son adecuados para 1/3 de la altura del tubo de ensayo y deben dejarse verticales para la condensación después de la esterilización.
6. Taponado
Después de empacar el medio, tapar la boca del tubo de ensayo o la boca del matraz Erlenmeyer con un tapón de algodón para evitar que microorganismos externos entren al medio de cultivo. y causar contaminación, y para garantizar una buena ventilación (el método de preparación del tampón se adjunta al final de este experimento).
7. Vendaje
Después de insertar el tampón, ate todos los tubos de ensayo con una cuerda de cáñamo y luego envuelva una capa de papel kraft sobre el tampón para evitar que se dañe durante el proceso. Esterilización: remojar en agua de condensación y luego atar el exterior con una cuerda de cáñamo. Utilice un marcador para marcar el nombre del medio de cultivo, el grupo y la fecha. El matraz Erlenmeyer con tapón está envuelto en papel kraft por fuera y atado en forma de nudo corredizo con cuerda de cáñamo. Es fácil de desatar cuando se usa. También use un marcador para marcar el nombre, el grupo y la fecha del medio de cultivo.
8. Esterilización
El medio anterior debe esterilizarse en autoclave a 1,05 kg/cm2 (15 libras/pulgada cuadrada) y 121,3 ℃ durante 20 minutos. Si la esterilización no se puede realizar a tiempo en circunstancias especiales, se debe conservar en el frigorífico.
9. Deje la pendiente en espera
Enfríe el medio de cultivo del tubo de ensayo esterilizado a aproximadamente 50 ℃, coloque un extremo del tapón de algodón del tubo de ensayo en la varilla de vidrio y mantenga el longitud de la pendiente en el Es apropiado exceder la mitad de la longitud total del tubo de ensayo.
10. Inspección de esterilidad
Colocar el medio de cultivo esterilizado en un invernadero a 37°C durante 24-48 horas para comprobar si la esterilización está completa.
Adjunto: Fabricación de tampones
Los tampones tienen dos funciones: una es prevenir la contaminación bacteriana y la otra es asegurar una buena ventilación. Por tanto, la calidad del tampón tiene una gran influencia en los resultados experimentales. El tampón correcto debe tener una forma, tamaño y estanqueidad que sean completamente compatibles con la boca del tubo de ensayo (o la boca de un matraz Erlenmeyer). Si está demasiado apretado, dificultará la circulación del aire y hará que su operación sea incómoda; Si está demasiado suelto, no logrará el propósito de filtrar las bacterias. Al agregar el tapón, 1/3 de la longitud del tapón debe quedar fuera de la boca del tubo de ensayo y 2/3 deben estar dentro de la boca del tubo de ensayo, como se muestra en la Figura V-3. El proceso de fabricación de tampones se muestra en la Figura V-4.
Además, los tapones de ventilación se utilizan a menudo en experimentos microbiológicos e investigaciones científicas. El llamado tapón de ventilación está hecho de varias capas de gasa (normalmente 8 capas) superpuestas entre sí, o de una capa de algodón distribuida uniformemente entre dos capas de gasa. Este tapón de ventilación generalmente se agrega a la boca de un matraz Erlenmeyer que contiene medio de cultivo líquido. Después de la inoculación, colóquelo en una coctelera para agitar el cultivo para obtener una buena aireación y promover el crecimiento bacteriano o la fermentación. La forma del tapón de ventilación