Determinación del contenido de antocianinas
Este método es adecuado para la determinación del contenido de proantocianidinas en diversos tejidos y órganos vegetales y sus preparaciones (como extracto de semilla de uva, extracto de corteza de pino, etc.).
1. Descripción general del método
Las proantocianidinas (también conocidas como taninos condensados) son oligómeros y polímeros de flavan-3-oles y son compuestos polifenólicos. A diferencia de otros compuestos fenólicos, los flavanoles (taninos condensados, monómeros, dímeros, etc.) pueden reaccionar con la vainillina en medios ácidos para formar sustancias coloreadas. Su longitud de onda de absorción máxima es de 500 nm, que se puede utilizar para la medición del método colorimétrico.
2. Instrumento
Espectrofotómetro.
3. Reactivos
El agua utilizada es agua desionizada o agua destilada de pureza equivalente.
(1) La vainillina, el metanol y el ácido clorhídrico concentrado son todos de grado analítico.
(2) Proantocianidinas o catequinas purificadas.
(3) Solución de vainillina en metanol al 4%.
(4) Solución estándar: disolver proantocianidinas purificadas en agua destilada para preparar una solución madre de 1 mg/mL y luego diluir la solución madre a una concentración de 1×10-2 mg/mL para preparar 1 solución estándar mg/mL. Las soluciones de uso estándar deben prepararse el día de la medición.
Si no se dispone de proantocianidinas purificadas, se pueden utilizar catequinas en su lugar. El método de preparación es el mismo que el anterior.
4. Pasos de determinación
(1) Preparación de proantocianidinas en la muestra: Utilizar 4 veces el volumen de acetona + agua (7+3, v/v) o 60 % de metanol. , se destiló a presión reducida a 40°C para eliminar el disolvente orgánico, se lavó la fase acuosa con éter y se diluyó a volumen.
Las preparaciones de proantocianidina sólidas liofilizadas se disuelven directamente en agua (primero agregue una pequeña cantidad de metanol para ayudar a disolver) para hacer que la proantocianidina sea líquida.
La solución madre de antocianinas debe almacenarse en un lugar oscuro a 5°C para su uso posterior.
(2) Medición de la muestra: envuelva bien el tubo de ensayo (14 mm × 20 mm) con papel de aluminio, dejando solo la boca del tubo para agregar la muestra. Agregue 0,5 ml de muestra al tubo de ensayo, luego agregue 3,0 ml de solución de vainillina y metanol al 4 %, luego agregue 1,5 ml de ácido clorhídrico concentrado, mezcle bien y desarrolle color a temperatura ambiente durante 15 minutos. Finalmente, se realizó colorimetría a una longitud de onda de 500 nm.
Se puede realizar una curva estándar siguiendo los pasos anteriores (es decir, el valor de absorción de 0,1 mg de proantocianidinas a 500 nm es 0,55).
5. Resultados del cálculo
Fórmula de cálculo de la cantidad de proantocianidinas,
Proantocianidinas (1×10-3mg) = A500nm÷0,55×100× V
En la fórmula, V: el volumen de dilución de la muestra (veces).
6. Precauciones
(1) El rango de detección de este método es (5～500)×10-3 mg/0,5 ml de solución de muestra. La precisión y la exactitud son superiores a 1 × 10-3 mg.
(2) El tubo de reacción debe remojarse en detergente durante 24 horas y limpiarse a fondo.
(3) Al comparar colores, utilice agua como blanco.
(4) El valor de OD a una longitud de onda de 500 nm debe controlarse por debajo de 3.
(5) Cuando el contenido de proantocianidina en la muestra es alto, el valor de A500 nm medido sin vainillina debe restarse del valor de A500 nm medido sin vainillina.
(6) La solución cromogénica debe almacenarse alejada de la luz.
También existe el método de diferencia de pH
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