Buscando un método sencillo para detectar antibióticos en los alimentos (soy profesor y quiero hacer este experimento)
Con el desarrollo de la industria láctea, los antibióticos se utilizan ampliamente en la prevención y el tratamiento de las enfermedades de las vacas lecheras. Las principales fuentes de antibióticos en la leche fresca son: primero, los antibióticos utilizados para tratar a las vacas enfermas durante la lactancia migrarán del cuerpo de la vaca a los residuos de la glándula mamaria y entrarán en la leche. Los datos muestran que las vacas tratadas tienen residuos de antibióticos en la leche dentro de los 5 días; en segundo lugar, para prevenir enfermedades de las vacas y aumentar la producción, agregar antibióticos al alimento de las vacas también causará residuos de antibióticos en la leche; en tercer lugar, debido al mal manejo de los pastos y al ordeño; No existe un sistema de higiene estricto ni instalaciones de apoyo para almacenar la leche, y la adición artificial de antibióticos puede causar contaminación de la leche.
Los antibióticos en la leche no sólo son muy perjudiciales para la salud humana, sino que también traen pérdidas económicas a las empresas procesadoras de lácteos (porque no se pueden producir yogur ni queso). Por lo tanto, además de una alimentación científica y un manejo cuidadoso, también es necesario controlar estrictamente los residuos de antibióticos en la leche, además del correcto ordeño y la prevención de enfermedades, también es necesario estandarizar el uso de antibióticos; Según las disposiciones pertinentes de las normas nacionales, la leche producida por las vacas después de cinco días de medicación sólo puede utilizarse como leche cruda y deben detectarse sus residuos. La Organización Mundial de la Alimentación y la Agricultura (FAO), la Organización Mundial de la Salud (OMS), la Unión Europea (CE) y la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) tienen regulaciones claras sobre los residuos máximos de antibióticos en los alimentos de mi país. también cuenta con la "Norma de inspección para residuos de antibióticos" (GB 4689.27-94).
En la actualidad, los métodos de detección de residuos de antibióticos en la leche fresca se pueden dividir a grandes rasgos en tres categorías: bioensayos (ensayos microbianos, ensayos de receptores de radiación), inmunoensayos (radioinmunoensayo, inmunoensayo de fluorescencia, inmunoensayo ligado a enzimas), métodos de análisis físico y químico (espectroscopia, cromatografía y tecnología con guiones). A continuación se presentan varios métodos de detección comúnmente utilizados para residuos de antibióticos en la leche.
Método TTC
El método TTC es un método de detección biológica y es el estándar de detección de residuos de antibióticos en la leche fresca en mi país (GB 4689.27-94). El principio de determinación se basa en el efecto inhibidor de los antibióticos sobre los microorganismos. Si la leche contiene antibióticos, agregue bacterias (Streptococcus thermophilus) durante 2,5 a 3 horas y el indicador TTC (trifeniltetrazol) no se reducirá, por lo que la muestra quedará incolora. Si la leche no contiene antibióticos, la muestra es roja. De esta forma, el color de la muestra después del experimento sigue siendo positivo y la muestra teñida de rojo es negativa.
Pasos operativos específicos del método TTC:
1. Preparación de la solución bacteriana: Cultivar una sola cepa (Streptococcus thermophilus) en una incubadora a 36 1°C durante 15 horas, y luego use Diluya la leche descremada a 1:1 y reserve
2 Tome 9 ml de la solución de muestra a analizar, caliéntela en un baño de agua a 80 ℃ durante 5 minutos y luego enfríe. por debajo de 37 ℃, agregue 1 ml de solución bacteriana viable y caliéntelo en un baño de agua a 36 ℃ 1 ℃ 2 horas, agregue 0,3 ml de indicador TTC al 4%, 36 ℃ 1 ℃ baño de agua durante 30 minutos
3. Si el color de la solución de muestra no se vuelve positivo, si es rojo, es negativo; la solución de muestra es positiva, se incuba en un baño de agua durante 30 minutos, si no se desarrolla ningún color, es positivo. es rojo, es negativo.
La sensibilidad de varios antibióticos medida por el método TTC es: penicilina: 4 ppb, estreptomicina: 500 ppb, gentamicina: 400 ppb, kanamicina: 5000 ppb. Tiene las ventajas de bajo costo y fácil desarrollo. La desventaja es que lleva mucho tiempo y requiere que el operador tenga ciertos conocimientos profesionales. Durante el experimento, la preparación de la solución bacteriana y el control del proceso del baño de agua deben cumplir estrictamente con los procedimientos operativos; de lo contrario, es probable que se produzcan falsos positivos. ocurrir, lo que resulta en resultados de prueba inestables.
¿Delvotest? Método Sp (método de prueba Delvaux)
Este método se introdujo por primera vez en Guangdong, Hong Kong. Su aplicación se basa en el requisito de principios de la década de 1980 de que la leche cruda exportada desde Guangdong debía ser "no resistente". y debe ser La detección se realizó mediante el método Delvotest. Este método también es un ensayo biológico y sus reactivos son producidos por la empresa holandesa DSM y certificados por la AOAC. El principio es que el microorganismo Bacillus thermophilus producirá ácido después de ser cultivado a 64°C durante 2,5 a 3 horas. El ácido hará que el indicador BCP (púrpura de bromocresol) se vuelva amarillo; si la muestra de leche no contiene antibióticos, la muestra se volverá amarilla; amarillo después del cultivo. Si la muestra contiene antibióticos, se inhibirá el crecimiento del bacilo termófilo, no se producirá ácido y el indicador no cambiará de color.
¿Delvotest? Pasos de operación del método sp:
1. Coloque asépticamente la tableta nutricional en un tubo de ensayo pequeño.
2. Utilice una micropipeta para inyectar 0,1 ml de muestra de leche en un tubo de ensayo pequeño. Medio;
3. Coloque el tubo de ensayo pequeño en un baño de agua o en una incubadora precalentada a 64°C para el cultivo;
4) Sáquelo cada 3 horas y observe el cambio de color. . Si los 2/3 inferiores del medio sólido son amarillos, es negativo, y si los 2/3 inferiores del medio sólido son morados, es positivo.
¿Delvotest? El método Sp tiene amplio espectro y detectabilidad. -Más antibióticos incluyen lactámicos como sulfonamidas, tetraciclinas, macrólidos, aminoglucósidos, cloranfenicol, etc. , entre los cuales la penicilina y las sulfamidas son particularmente sensibles. La sensibilidad es: penicilina: 3ppb, estreptomicina: 300ppb, gentamicina: 400ppb, kanamicina: 2500ppb. ¿Delvotest? El método Sp es simple de operar, riguroso y práctico, fácil de juzgar, confiable en resultados y de costo moderado. Sin embargo, también es probable que se produzcan falsos positivos. Los experimentos han demostrado que cuando se añaden conservantes microbianos (como Nisn) a las muestras de leche o hay suficientes residuos de detergente en las muestras, el crecimiento del bacilo termófilo puede verse afectado y el experimento será positivo.
¿Papá? Legal
Este método es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). El analizador de detección y su kit producidos por la empresa estadounidense IDEXX han obtenido la certificación AOAC y utilizan tecnología ELISA competitiva. El principio básico es activar el portador en fase sólida con un anticuerpo específico, agregar una solución que contenga el antígeno a analizar y una cierta cantidad de antígeno marcado con enzima, y mantener la temperatura a 45 ℃ ± 5 ℃* *, de modo que Los antibióticos de la muestra compiten con los marcadores antibióticos incorporados. Unión de anticuerpos inmovilizados seguido de lavado y desarrollo de color. La enzima puede descomponer el complejo formado por la combinación de la etiqueta antibiótica incorporada y el anticuerpo inmovilizado para formar una sustancia coloreada. Midiendo el color y comparándolo con un objeto de referencia, se determina si el resultado es positivo o negativo.
¿Papá? Pasos de operación del método:
1. Agregue la muestra de leche al tubo de muestra, agite bien y caliente la muestra y la placa de detección durante 5 minutos;
2. la muestra bien, cuando se activa Cuando el anillo comienza a retroceder, presione el botón Snap
3. Después de 4 minutos de reacción, presione el botón Snap? El lector lee e imprime los resultados. Una lectura inferior a 1,05 se considera un valor negativo y una lectura superior a 1,05 se considera un valor positivo.
¿Papá? Este método combina la sensibilidad de las reacciones químicas enzimáticas con la especificidad de las reacciones inmunes antígeno-anticuerpo. Tiene buena sensibilidad y especificidad y la sensibilidad de la prueba se utiliza ampliamente. - Lactámicos: Penicilina: 5ppb, Amoxicilina: 10ppb, Ampicilina: 10ppb, Cefotaxima: 8ppb. Para la detección de tetraciclina y otros antibióticos, es necesario adquirir los reactivos correspondientes para la detección. ¿Explosión, explosión? El método es rápido y preciso y puede detectar leche en 9 minutos. - Los residuos de antibióticos como lactamas, tetraciclinas y sulfonamidas tienen lecturas semicuantitativas y pueden monitorear el uso de medicamentos en los pastos; el detector tiene buena estabilidad, alta reproducibilidad de los resultados y todo el proceso de detección es simple pero requiere la compra de instrumentos especializados; El costo de los instrumentos y reactivos es relativamente alto.
Método de detección por cromatografía líquida de alta resolución
Es un método de detección físico y químico que utiliza la reacción especial de grupos en moléculas de antibióticos para determinar su contenido. El proceso de detección adopta el principio de la cromatografía de gases, a través de una fase líquida de alta presión y un detector de alta sensibilidad, la velocidad de separación es rápida, la eficiencia es alta y la operación está automatizada. Generalmente, el contenido específico de antibióticos se puede detectar mediante extracción de muestras, desproteinización, centrifugación, purificación en columna, derivatización y otros pasos. , alta sensibilidad, pero los procedimientos de detección son complejos y el costo es alto, por lo que no es adecuado para laboratorios de pruebas a pequeña escala.
Existen muchos métodos tradicionales de detección de antibióticos, algunos de los cuales son engorrosos de operar, otros requieren condiciones experimentales estrictas y otros requieren demasiado tiempo. Esto no sólo causará pérdidas económicas y de tiempo a las empresas productoras de lácteos, sino que los resultados de las pruebas a menudo se ven afectados por las materias primas y auxiliares y las operaciones humanas. En vista de que los residuos de antibióticos en la leche son un problema de salud pública que afecta la salud humana, las empresas y ranchos lácteos deben prestar atención y fortalecer el trabajo de detección y utilizar algunos métodos simples, rápidos y precisos para monitorear la calidad del producto y proteger la salud del consumidor. .
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