Aislamiento, purificación y estudio de propiedades del polisacárido de Dieffenbachia.
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1 Introducción
Los polisacáridos son aldosas y/o cetosas que existen en la naturaleza. unidos por enlaces glicosídicos. El polisacárido es un componente esencial de todos los organismos vivos y está estrechamente relacionado con diversas funciones fisiológicas que mantienen la vida. En los últimos años, los polisacáridos derivados de plantas, organismos marinos y hongos han surgido como un tipo importante de productos naturales biológicamente activos. Se han descubierto uno tras otro varios polisacáridos con actividades antitumorales, inmunes, anticoagulantes, hipoglucemiantes y antivirales. Los polisacáridos tienen estructuras complejas porque tienen muchos residuos de monosacáridos diferentes, diferentes posiciones de unión y diferentes tipos de enlaces glicosídicos, que pueden formar diferentes conformaciones, diferentes masas moleculares relativas y enlaces de hidrógeno intra e intercatenarios.
Las primeras investigaciones sobre los polisacáridos se realizaron en la década de 1940, pero fue en la década de 1960 cuando la gente le prestó gran atención como promotor inmunológico de amplio espectro. Después de más de 40 años de desarrollo continuo, la gente ha pagado. Se le ha prestado más atención. Los polisacáridos, una clase de sustancias vitales importantes, han generado nuevos conocimientos, convirtiendo este tema en uno de los campos de investigación más activos en las ciencias de la vida [1]. Cada vez más estudios han encontrado que los polisacáridos son de gran valor para el cuerpo humano y se pueden dividir en tres categorías según sus fuentes: polisacáridos animales, polisacáridos vegetales y polisacáridos microbianos. Entre ellos, los polisacáridos vegetales como los contenidos en el ginseng, la escutelaria, el Acanthopanax, el aloe, etc. tienen efectos medicinales importantes, como la mejora del sistema inmunológico, efectos antitumorales y efectos antirradiación. Según informes de la literatura [2], se han aislado y extraído polisacáridos de casi 100 especies de plantas. Este tipo de polisacárido proviene de una amplia gama de fuentes y no tiene citotoxicidad. Tiene pocos efectos secundarios cuando se aplica a organismos vivos. Por lo tanto, la investigación sobre polisacáridos vegetales se ha convertido en un campo candente en el campo médico.
Los polisacáridos (PS) también se denominan polisacáridos. Existe en organismos como animales, plantas superiores, microorganismos (bacterias y hongos) y algas. Los polisacáridos tienen actividades y funciones biológicas complejas y multifacéticas. Pueden usarse como promotores inmunológicos de amplio espectro y tienen funciones inmunomoduladoras. Por ejemplo, los polisacáridos pueden tratar el reumatismo, la hepatitis viral crónica, el cáncer y otras enfermedades del sistema inmunológico, e incluso pueden luchar contra las enfermedades. Virus del SIDA [3]; También tiene efectos antiinfecciosos, antirradiación, anticoagulantes, hipoglucemiantes e hipolipidémicos; promueve la biosíntesis de ácidos nucleicos y proteínas, puede controlar la división y diferenciación celular, regular el crecimiento y el envejecimiento celular; Los polisacáridos son extremadamente tóxicos como fármacos pequeños, por lo que la investigación sobre los polisacáridos ha despertado un gran interés. El peso molecular de los polisacáridos es de decenas de miles o millones. Los polisacáridos vegetales incluyen almidón, celulosa, glucano (como el lentinano), goma de fructano, mucílago, lípidos viscosos (como el agar), etc. Algunos de los polisacáridos que activan el sistema inmunológico son el cáncer. inhibidor celular, pero menos específico. En la década de 1980, los grupos de investigación como el de Franz G en Alemania fueron los más activos, demostrando que muchos polisacáridos vegetales y fúngicos tienen actividad antitumoral. Esto incluye lentinano, polisacárido de Polyporus, polisacárido de Polyporus, etc., que se han utilizado clínicamente.
El polisacárido también es un buen coadyuvante en medicina. En los últimos años se ha descubierto que las cadenas de azúcar de los polisacáridos desempeñan un papel decisivo en la biología molecular. Además, puede controlar la división y diferenciación celular y regular el crecimiento y el envejecimiento celular. Los polisacáridos también se utilizan ampliamente en la industria alimentaria, la industria de la fermentación y la industria petrolera. Se han desarrollado cada vez más ingredientes de polisacáridos vegetales y se ha desarrollado y confirmado su valor de aplicación en el campo alimentario, inyectando nueva vitalidad al rápido desarrollo de la industria alimentaria. En los últimos años, con la comprensión de la gente sobre el papel de los polisacáridos y los conjugados de azúcar en las ciencias de la vida, así como el rápido desarrollo y mejora de la tecnología de investigación de polisacáridos, la investigación de polisacáridos ha surgido repentinamente. La comunidad científica internacional considera la investigación de polisacáridos como una frontera. campo de las ciencias de la vida, e incluso propuso El siglo XXI es el siglo de los polisacáridos [4]. Muchos polisacáridos vegetales tienen actividad inmunomoduladora, que puede mejorar la función del sistema inmunológico del cuerpo, como los macrófagos y los linfocitos, y activar o promover la producción de anticuerpos y complementos, y la inducción de interferones también puede usarse para prevenir y tratar la diabetes y promover; Curación y reparación de úlceras gástricas, tiene muchos efectos como antirradiación, reducción de lípidos en sangre, etc.
Por ello, los polisacáridos y sus derivados se han convertido en los últimos años en uno de los focos de investigación de las medicinas naturales como moduladores de efectos biológicos.
Por lo tanto, la investigación sobre la separación y purificación de polisacáridos tiene una importancia práctica importante. Este artículo estudia principalmente el fraccionamiento por precipitación de alcohol, cromatografía en columna, etc.
2 Parte experimental
2.1 Principales reactivos e instrumentos
Serie Sephadex DEAE, Compañía Pharmacia
Amilasa salival, Compañía Americana Sigma
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Gel SDS
Reactivo azul de Coomassie
Reactivo β-glucosil-Yarive
Otros reactivos son de grado analítico
Columna PD 10, Amersham harmacia Biotech Company
Colector de fracciones automático
Evaporador rotatorio RE52CS, Shanghai Medical Equipment Factory
Espectrofotómetro UV-visible modelo 6010, Angel Shanghai Analytical Instrument Co., Ltd.
Cromatógrafo líquido de alta resolución 2690, Waters Company, EE. UU.
2.2 Método experimental fficeffice" /gt;
2.2.1 Eliminación de almidón
Convierta el polisacárido crudo de Dieffenbachia Dieffenbachia en una solución acuosa al 20 % y elimine el almidón con la enzima amilasa salival a 37 °C.
2.2.2 Eliminación de proteínas
Método de desecho para eliminar proteínas: agregue cloroformo y n-butanol (proporción 5:1) a la solución acuosa de muestra en una proporción de volumen de 4:1 y centrifugue (10000 rpm, 20 min) para eliminar la proteína similar a un gel. Repita varias veces (3 veces) hasta que se elimine la proteína. El efecto de la eliminación de proteínas se prueba mediante la reacción de ninhidrina y el resultado es negativo (o prueba de biuret, al mismo tiempo, la curva de absorción de UV de la muestra después de la eliminación de proteínas); se mide a 200 ~ 280 nm para detectar el efecto. El pico de absorción de UV a 260 ~ 280 nm de la solución de polisacárido después de eliminar la proteína desaparece, lo que indica que el polisacárido no contiene proteína.
2.2.3 Sal. eliminación
Utilice una membrana semipermeable para la solución de tratamiento anterior. Elimine las impurezas de moléculas pequeñas, como los oligosacáridos, mediante diálisis con agua de flujo a contracorriente y dialice con agua destilada durante 48 horas. .4 Clasificación de precipitación con alcohol
Calentar y disolver 15 g de polisacárido crudo en 250 ml de H2O, enfriar y agregar 40 % de precipitado con etanol, agitar, dejar reposar y filtrar con succión para obtener el precipitado (OC-1). ). Use etanol al 40 % para precipitar tres veces. Combinar el filtrado y concentrar.
Tomar la solución concentrada y usar etanol al 60 %, agitar para disolver, dejar reposar y filtrar con succión para obtener un precipitado. (OC-2) luego se precipita con etanol al 60% tres veces y el filtrado (solución de alcohol al 60%) se combina para obtener un precipitado (OC-3).
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Publicado en 2009-2-9 14:17 | Ver solo este autor
2.2.5 Separación en columna fficeffice" /gt;
Precipitación con etanol al 60 % (OC-2) Disolver en agua caliente y mezclar con resina Sephadex DEAE en un vaso de precipitados. Después del equilibrio, la resina se coloca en un embudo de decantación y se lava con una solución de NH4HCO3 de 0,5 mol/l y se divide en dos componentes: el eluyente de una solución de NH4HCO3 de 0,5 mol/l (OC-2-1) y el componente unido a la resina (. OC-2-2).
El eluyente de solución de NH4HCO3 de 0,5 mol/l (OC-2-1) se evapora hasta sequedad y se disuelve en agua, se coloca en una columna DEAE (4,5 x 12,0) y luego se lava isométricamente con 0,2 mol/l. Solución de NH4HCO3 Desintoxicar, medir el valor de DO de cada eluyente y dibujar una curva de elución utilizando el número de tubos de recolección versus el valor de DO. Los componentes del mismo pico se combinan para producir 7 componentes: OC-2-1-a (parte no unida), OC-2-1-b, OC-2-1-c, OC-2-1-d, OC -2-1-e, OC-2-1-f (eluyente de NH4HCO3 de 1 mol/l), OC-2-1-g (eluyente de acetato de sodio de 1 mol/l).
Los valores de absorbancia OD de los diferentes componentes anteriores se midieron utilizando un espectrofotómetro UV a longitudes de onda de 215 y 280 nm.
Evaporar cada componente hasta sequedad a presión reducida por debajo de 60°C, y luego utilizar una columna PD 10 (Sephadex G-25M) para eliminar sales y moléculas pequeñas.
Utilice precipitación de alcohol al 60% parte del agua caliente para disolver la columna de resina DEAE, y utilice diferentes concentraciones de NH4HCO3: 0,2 M, 0,25 M, 0,4 M, 0,5 M, 1,0 M