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Estudios anteriores han demostrado que es probable que las células neoplásicas de Schwann sean las células de origen de los tumores de células de Schwann. Este estudio extrajo y purificó células tumorales de muestras de tejido de neurofibromatosis tipo II y estableció una plataforma experimental in vitro para futuras investigaciones y mejoras del tratamiento farmacológico de la neurofibromatosis tipo II. Alrededor del 50% de los pacientes con neurofibromatosis tipo II tienen antecedentes familiares claros y el 50% de ellos son causados por nuevas mutaciones genéticas. Las mutaciones en el gen NF2 se presentan de muchas formas. La investigación individualizada sobre la enfermedad a nivel genético puede ayudarnos a comprender las diferencias individuales en las mutaciones del gen NF2 y su relación con los fenotipos, y a descubrir nuevas formas de mutación genética de la enfermedad. Comparar los genes NF2 de los pacientes y sus hijos es de gran importancia para predecir si los hijos del paciente sufrirán la enfermedad en el futuro. Este estudio tiene como objetivo establecer un método de análisis genético molecular clínicamente aplicable para pacientes con neurofibromatosis tipo II y su descendencia para guiar el asesoramiento genético, el seguimiento individualizado de la enfermedad, el seguimiento y la intervención clínica en familias con neurofibromatosis tipo II. Este estudio se divide en las dos partes siguientes: Parte 1: Establecimiento de un método para la extracción y purificación in vitro de células de Schwann de tumores de neurofibromatosis tipo II para obtener células de pureza suficiente y mejorar la tasa de éxito del cultivo primario. Como material experimental se utilizaron muestras frescas de tejido tumoral de células de Schwann recolectadas de 10 pacientes con neurofibromatosis tipo II. Las células tumorales de Schwann se extrajeron utilizando el método de cultivo y digestión con colagenasa tipo I, y las células se purificaron utilizando técnicas de digestión rápida con tripsina de baja concentración, unión diferencial y detección de clones. La morfología celular se observó al microscopio y la expresión de la proteína S-100 se detectó mediante inmunocitoquímica. Las células purificadas mediante cultivo in vitro se identificaron como células tumorales de Schwann. Los resultados mostraron que ***5 de cada 10 muestras de tejido tumoral se cultivaron con éxito para obtener células tumorales de Schwann. En el tercer día del cultivo primario de células tumorales de Schwann, se puede observar una gran cantidad de células fusiformes o triangulares bipolares. Las células se purificaron utilizando métodos de digestión rápida con tripsina de baja concentración y de unión diferencial. Después de la tercera generación de cultivo, se observaron 4-5 clones de células bajo un microscopio de contraste de fase invertida. La tinción inmunocitoquímica mostró una expresión positiva de la proteína S-100. La pureza de las células de Schwann tumorales alcanzó >:95%, con buena viabilidad y paso estable. Parte 2: Establecer un método de análisis genético molecular para la neurofibromatosis tipo II, realizar un diagnóstico genético molecular de los pacientes con neurofibromatosis tipo II y su descendencia, y orientar el asesoramiento genético y la individualización de las familias de neurofibromatosis tipo II. Vigilancia, seguimiento e intervención clínica de la enfermedad. El ADN genómico se extrajo de células de Schwann cultivadas primarias y de la sangre del paciente; entre 10 pacientes con neurofibromatosis tipo II, 2 tuvieron descendencia y dieron su consentimiento informado para someterse a una secuenciación genética, y el ADN genómico se extrajo de su sangre. El ADN genómico de las células de Schwann sanguíneas de segunda generación de los padres y del tumor del paciente se secuenció a través del gen NF2 (exones E1-15 y E17 y sus intrones adyacentes). Con base en las manifestaciones y síntomas clínicos del paciente, formularemos una intervención clínica razonable y un plan de seguimiento, realizaremos asesoramiento genético y desarrollaremos un plan de seguimiento para aquellos con alto riesgo de neurofibromatosis tipo II en su descendencia. Este estudio estableció un banco de muestras de tumores de neurofibromatosis tipo II y un banco de ADN genómico en nuestro departamento. Los resultados de la secuenciación de genes mostraron que el sitio de mutación del gen NF2 extraído de las células tumorales de Schwann y de la sangre del paciente era el mismo. En el primer grupo, los sitios de mutación genética de madre e hija eran exactamente los mismos, mientras que en el segundo grupo, los sitios de mutación genética de madre e hijo no eran exactamente los mismos, y todos los sitios de mutación detectados estaban ubicados cerca del área de control. . Conclusión: 1. El método de cultivo primario in vitro combinado con el método de digestión rápida enzimática de baja concentración, el método de unión diferencial y el método de detección de clones pueden eliminar eficazmente los fibroblastos en el tejido tumoral de células de Schwann y obtener células tumorales de Schwann con alta pureza y buena viabilidad, que pueden usarse para patogénesis y Tratamiento de la neurofibromatosis tipo II.
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