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Las pruebas cutáneas se utilizan para diagnosticar la DTH y los antígenos comúnmente utilizados incluyen PPD, virus de las paperas, Candida albicans, etc. En ensayos en humanos, se inyectaron pequeñas cantidades de antígeno soluble en la piel del antebrazo. Después de los 24 a 48 años, mida el tamaño del enrojecimiento, la hinchazón y la induración. Si el diámetro de la induración es mayor a 10 mm se considera positivo, indicando que el sujeto tiene cierta inmunidad celular al patógeno. Si no hay reacción en la prueba cutánea, la prueba se puede repetir con una concentración más alta de antígeno. Deben eliminarse los errores técnicos en las pruebas cutáneas. También es posible que el sujeto nunca haya estado expuesto a este antígeno, o es posible que la falta de respuesta se deba a un defecto en la función inmune celular o a una infección grave (sarampión, tuberculosis crónica diseminada). 2. Las alergias de contacto suelen ser causadas por compuestos de bajo peso molecular como el dinitroclorobenceno (DNCB). Este compuesto se une a las proteínas de la piel y provoca una reacción DTH. En experimentos con animales, después de aplicar DNCB en la piel por primera vez, se estimuló cada 7 a 10 días y la piel dio positivo. Esta prueba ya no es utilizada por humanos. En segundo lugar, se probaron in vitro el número y la función de los linfocitos mediante métodos de detección in vitro de inmunidad celular. Las muestras de sangre son las más fáciles de recolectar. En primer lugar, es necesario aislar o purificar los linfocitos. Generalmente, se utiliza glucomanano-diatrizoato de meglumina para preparar una solución de estratificación de linfocitos con una gravedad específica de 1,077. Cuando la sangre se centrifuga sobre un líquido en capas de linfocitos, los glóbulos rojos (1.092), los leucocitos polimorfonucleares (1.090) y los linfocitos (1.070) se separan entre sí debido a su diferente gravedad específica. Los linfocitos y monocitos forman una capa delgada en la interfaz del plasma y el líquido estratificado. Se separaron cuidadosamente las células de esta fina capa, de las cuales los linfocitos representaban el 80%. Entre los linfocitos, las células T representan el 80% y las células B representan del 4 al 10%, que se consideran células no DT y no B. El recuento de células T es (1) método de roseta E: hay un receptor SRBC (CD2) en la superficie de las células T humanas, que puede combinarse con SRBC para formar una estructura de roseta, y la suspensión de RBM se separa mediante capas de líquido. Después de la incubación a 37°C durante 5 a 10 minutos, y luego a 4°C durante la noche, se tomó la suspensión celular y se contó. Alrededor de 70 a 80 linfocitos en la sangre periférica forman rosetas, es decir, células T. Actualmente, este método se ha utilizado para aislar células T sin contarlas. (2) Cuente las células T utilizando anticuerpos monoclonales: divida la PBM humana en tres partes iguales y utilice CD3 antihumano de ratón y CD3 antihumano respectivamente. Luego utilice el anticuerpo IgG anti-ratón de conejo marcado con FITC como anticuerpo secundario para la tinción de inmunofluorescencia indirecta y detecte los resultados bajo un microscopio de fluorescencia o un citómetro de flujo. Las células teñidas con anticuerpos CD3 en PBM se denominan células CD3, es decir, células T totales. Las personas normales con PBM tienen células T que representan entre el 70 y el 80%. La suma de células CD4 y CD8 humanas normales debe ser coherente con la cantidad de células CD3. La proporción de células CD4 a CD8 en personas normales es aproximadamente 2/1, mientras que la proporción en pacientes con SIDA es inferior a 1,7. Prueba de activación de células T Las células T pueden activarse mediante sustancias no específicas llamadas mitógenos y transformarse en linfocitos. El proceso de transformación de las células T puede ir acompañado de un aumento de la síntesis de ADN, ARN y proteínas y, en el mejor de los casos, puede conducir a la división celular. El número de linfocitos transformados se puede contar con un microscopio óptico. La timidina tritiada (3HTdR) también se puede utilizar para dopar los linfocitos en división, y se puede utilizar un contador de centelleo líquido para examinar la cantidad de 3H-TdR dopado para determinar la tasa de transformación de los linfocitos. Recientemente, existe un método para examinar la respuesta proliferativa de los linfocitos que puede medirse mediante un instrumento que no utiliza isótopos, llamado ensayo MTT. 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