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- ¿Cuál es la importancia de estudiar las interacciones de las proteínas? ¿Cómo aislar complejos multiproteicos en las células? (Es necesario ser muy detallado o señalar la fuente directamente)La interacción entre la clara de huevo y la proteína forma una parte importante de la red de reacciones bioquímicas de la célula. Las redes de interacción de proteínas y las redes reguladoras transcripcionales son importantes en la regulación de las células y su señalización. Se transfiere un método para estudiar las interacciones proteína-proteína en el espacio primitivo, el primer método del catálogo de habilidades experimentales. 1. Sistema de dos híbridos de levadura El sistema de dos híbridos de levadura es un método importante ampliamente utilizado en la investigación genómica de interacción de proteínas. El principio es que cuando la proteína objetivo y la proteína cebo se unen específicamente, la proteína cebo se une al promotor del gen indicador e inicia la expresión del gen indicador en las células de levadura. Si se detecta el producto de expresión del gen informador, indica que hay una interacción entre los dos, en caso contrario no hay interacción entre los dos. Después de la miniaturización y la disposición, esta tecnología se puede utilizar para estudiar las interacciones de proteínas a gran escala. En el trabajo real, la gente ha desarrollado sistemas de mezcla única, tres sistemas de mezcla y sistemas de mezcla inversa según las necesidades. Angermayr et al. diseñaron un sistema de dos híbridos mediado por la proteína SOS. Se pueden estudiar las funciones de las proteínas de membrana, enriqueciendo la funcionalidad del sistema de dos híbridos de levadura. Además, la funcionalidad del sistema de dos híbridos de levadura se ha ampliado a la identificación de proteínas. 2. La tecnología de presentación en fagos conecta la secuencia de ADN de un anticuerpo monoclonal con el gen que codifica la proteína de la cubierta del fago. A medida que el fago crece, el anticuerpo monoclonal correspondiente se expresa en la superficie y luego el fago pasa a través de la columna. Si la columna contiene una proteína de interés, se unirá específicamente al anticuerpo correspondiente. Esto se llama tecnología de visualización de fagos. Esta técnica también se utiliza principalmente para estudiar interacciones entre proteínas. No solo tiene las características de alto rendimiento y simplicidad, sino que también tiene las ventajas de obtener genes directamente, seleccionar mezclas complejas con alta selectividad y evaluar directamente la especificidad de la unión mutua cambiando las condiciones durante el proceso de selección. Actualmente, se ha utilizado tecnología de presentación en fagos optimizada para mostrar bibliotecas de ADNc de dos líneas celulares especiales, humana y de ratón, y se han aislado moléculas señal en la vía de transducción de señales del factor de crecimiento epitelial humano. 3. Plasma * * * Tecnología de vibración La resonancia de plasmón superficial (SPR) se ha convertido en un nuevo método para estudiar las interacciones de proteínas. Su principio es utilizar películas a nanoescala para absorber "proteínas cebo". Cuando la proteína que se va a probar se une a la proteína del cebo, las propiedades de vibración de la película cambiarán y el estado de unión de las dos proteínas se puede conocer mediante la detección. La ventaja de la tecnología SPR es que no requiere marcadores ni colorantes, y el proceso de reacción se puede controlar en tiempo real. El método es rápido, seguro y también puede utilizarse para detectar interacciones entre proteínas y ácidos nucleicos y otras macromoléculas biológicas. 4. Tecnología de transferencia de energía por fluorescencia La transferencia de energía vibratoria por fluorescencia (FRET) se usa ampliamente para estudiar la distancia y la interacción entre moléculas; combinada con la microscopía de fluorescencia, se puede obtener cuantitativamente la información espaciotemporal de proteínas, lípidos, ADN y ARN en organismos. Con el desarrollo de la proteína verde fluorescente, la microscopía de fluorescencia FRET puede medir las propiedades dinámicas de las moléculas en las células vivas en tiempo real. Se propone un método simple para medir cuantitativamente la eficiencia de FRET y la distancia donante-aceptor. Este método solo necesita usar un conjunto de filtros y medir una relación, utilizando los espectros de emisión del donante y el aceptor para eliminar la interferencia entre los espectros. Este método es simple y rápido y puede medir cuantitativamente la eficiencia de FRET y la distancia entre el donante y el aceptor en tiempo real, especialmente adecuado para pares donante-aceptor basados en GFP. 5. Tecnología de chips de proteínas y anticuerpos La aparición de la tecnología de chips de proteínas ha aportado nuevas ideas a la investigación de la genómica de proteínas. Uno de los principales contenidos de la investigación en proteómica es estudiar los cambios cuantitativos, la miniaturización, la integración y la cuantificación de alto rendimiento de los niveles de proteínas en diferentes estados fisiológicos. El chip de anticuerpos es una muy buena herramienta de investigación y el chip de más rápido crecimiento entre los chips, y su tecnología se ha vuelto cada vez más madura. Algunos de estos chips de anticuerpos se han desarrollado para aplicaciones clínicas, como los chips de anticuerpos marcadores tumorales, y muchos se han aplicado en diversos campos. Verbo intransitivo inmune* * *Técnica de precipitación inmune* *La precipitación es una técnica utilizada principalmente para estudiar las interacciones proteína-proteína[/url].
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