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Características del sistema de expresión de la levadura metanólica 1.1 El huésped Pichia pastoris se utilizó para producir proteína unicelular (SCP) en la década de 1970. Tiene una buena base de fermentación y la densidad celular puede alcanzar los 100 g/l de peso seco. Los ingredientes de su medio de crecimiento incluyen sales inorgánicas, oligoelementos, biotina, fuentes de nitrógeno y fuentes de carbono, y son baratos y no tóxicos. Puede crecer rápidamente en un medio con metanol como única fuente de carbono, y la enzima clave de la vía del metabolismo del metanol, la alcohol oxidasa AOX, puede representar el 30% de la proteína soluble en las células [1]. Sin embargo, AOX no se puede detectar en células cultivadas con glucosa, glicerol o etanol como fuentes de carbono. La síntesis de AOX está regulada a nivel transcripcional. Su promotor genético tiene funciones reguladoras obvias y puede usarse para regular la expresión de genes extraños. Esta regulación está controlada por mecanismos de represión/desrepresión general de fuentes de carbono y de inducción y reenfasis de fuentes de carbono específicas. Los genes exógenos no se expresan en fuentes de carbono distintas del metanol, pero después de agregar metanol al medio de cultivo, se induce la expresión de genes exógenos. Existe una especie de orgánulo llamado microsoma en Pichia pastoris. La peroxidasa se sintetiza en grandes cantidades en este orgánulo, por lo que también se le llama peroxisoma. La proteína sintetizada se puede almacenar en microsomas, lo que puede protegerla de la degradación por proteasas y no causará toxicidad a las células. 1.2 Vector El vector de Pichia pastoris es un vector de integración. Los vectores de expresión comunes incluyen pPIC3, pPIC9, pHIL-D1, pA0804, pA0815, pPSC3K, etc. La Figura 1 es un vector de expresión típico de Pichia pastoris. Este vector contiene el promotor de la alcohol oxidasa-1 (AOX 1) y el terminador de la transcripción (5'AOX 1 y 3'AOX 1), que están separados por múltiples sitios de clonación (MCS) donde se pueden insertar los exosomas del gen fuente. El vector también contiene el marcador seleccionable del gen de la histidina deshidrogenasa (HIS4) y la región 3'AOX 1. Cuando el vector de integración transforma al receptor, sus 5'AOX 1 y 3'AOX 1 pueden recombinarse con los genes homólogos en el cromosoma, de modo que todo el vector y el gen exógeno se pueden insertar en el cromosoma del receptor. en el promotor 5'AOX 1 expresión bajo control. 1.3 La construcción de cepas de expresión es similar al establecimiento de sistemas de expresión de ingeniería genética para S. cerevisiae. Los métodos básicos para construir cepas de expresión de Pichia pastoris son los siguientes: (1) Métodos clásicos de manipulación genética (como aislamiento de mutantes, análisis de complementación y retrocruzamiento). y análisis de esporas únicas); (2) Métodos genéticos moleculares (como transformación de ADN y reemplazo de genes). [3]) Para obtener una cepa de expresión de proteína extraña altamente estable, el vector de expresión de Pichia pastoris y genes extraños se integran en el locus del genoma del cromosoma huésped mediante recombinación homóloga. Para el vector de expresión pPIC3 que se muestra en la Figura 1, se puede integrar en el cromosoma de dos maneras. Una es escindir el vector plasmídico linealmente en un único sitio de restricción del fragmento de ADN His4 o 5'AOX 1 e integrarlo en el cromosoma mediante un único intercambio (Fig. 2A y b). Otro tipo de vector plasmídico se digiere con Bgl para liberar el casete de expresión que contiene la secuencia terminal AOX1 y realiza un reemplazo genético en un solo paso con el gen AOX1 en el cromosoma huésped (Figura 2C). La cepa de expresión obtenida de esta manera es deficiente en AOX1 y su tasa de metabolismo del metanol se ralentiza significativamente, pero a veces el nivel de expresión de proteínas extrañas es mucho mayor que el de la cepa de tipo salvaje, especialmente en el cultivo en matraz agitado. A diferencia de los vectores de expresión de plásmidos autorreplicantes, el número de copias de los vectores de expresión integradores puede variar ampliamente. Las cepas de expresión que contienen múltiples copias del gen extraño también sintetizaron más proteínas. Hay dos formas de obtener cepas de expresión de copias múltiples. Una es seleccionar de forma natural un gran número de transformantes mediante electroforesis SDS-PAGE [6], inmunohibridación [7] o hibridación de colonias-punto. Se obtuvo una cepa de expresión de alto rendimiento. La otra es insertar múltiples copias de casetes de expresión en un solo vector antes de la transformación [8] y luego integrarlas en el cromosoma receptor mediante intercambio. Se demostró que las cepas de expresión de copias múltiples obtenidas mediante estos dos métodos eran estables bajo la presión de selección de productos del cultivo fermentador.
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- Jinwei DentalLa úlcera bucal es una enfermedad común de la mucosa bucal, también conocida como úlcera aftosa. El dolor es muy notorio durante el ataque y desaparece por sí solo sin tratamiento. Algunas úlceras orales recurrentes tienen un gran impacto en el trabajo y la vida del paciente. Aún no se ha determinado la causa específica de las úlceras orales, pero su aparición está relacionada con una variedad de factores, como la disminución de la función inmune celular; enfermedades gastrointestinales como hinchazón, diarrea o estreñimiento; factores mentales como el estrés mental elevado; y falta de sueño; falta de oligoelementos como zinc, hierro, ácido fólico, vitamina B12, factores genéticos y otros. Para curar fundamentalmente las úlceras orales, la forma fundamental es mejorar la condición física y mejorar la inmunidad. Las personas que sufren con frecuencia de úlceras orales deben prestar atención a: ajuste psicológico para lograr alivio y optimismo; mantener la higiene bucal y de la piel, cepillarse los dientes, hacer gárgaras y bañarse con frecuencia; prestar atención a las deposiciones suaves y dormir lo suficiente; , coma más frutas y verduras frescas para limpiar el estómago y evite masticar chicle, chocolate, tabaco y alcohol, café, comida caliente, barbacoa picante, frituras y otros alimentos que pueden provocar o agravar fácilmente las úlceras bucales. Cuando se producen úlceras orales, las úlceras pueden tratarse mediante cualquiera de los siguientes métodos: 1. Aplique la inyección de gentamicina en la superficie de la úlcera bucal, luego vuelva a aplicarla después de unos minutos, 4 veces al día, y se curará el día 23. 3. Muele las tabletas de vitamina C hasta convertirlas en polvo y espolvoréalas sobre la úlcera o colócalas directamente sobre el área afectada, dos veces al día. Generalmente, se puede curar en 3 o 4 veces; los pacientes leves se pueden curar en 1 o 2 veces, pero el dolor será evidente al tomar el medicamento por primera vez. Aplique Yunnan Baiyao a la úlcera dos veces al día y, por lo general, sana en 23 días. También se puede aplicar a la superficie de la úlcera una solución de nitrato de plata 5.1 o tintura de ácido tricloroacético 5 y crema de prednisona. En casos graves, se puede considerar el tratamiento sistémico: 1. Complementar la vitamina B1, B2, B6, vitamina C y zinc puede mejorar la capacidad de autocuración del cuerpo cuando se producen úlceras. Cuando hay una infección secundaria en la úlcera, se pueden tomar los antibióticos de forma adecuada. Cuando las úlceras reaparecen, se puede considerar el uso de medicamentos que regulen la función inmune, como las hormonas adrenocorticales, generalmente en dosis pequeñas a medianas y con un tratamiento corto, o tomar medicamentos que regulen la función inmune, como ginseng, astrágalo, cordyceps, Liuwei. Pastillas Dihuang y Buzhong Yiqi Maru et al. , para reducir la recurrencia. Cabe recordar que los tratamientos anteriores deben realizarse periódicamente en el hospital, especialmente en el caso de úlceras bucales rebeldes y recurrentes, debiéndose descartar la posibilidad de enfermedades malignas. Receta simple para el tratamiento de úlceras 14 huevos: Ponga los huevos en un bol y revuélvalos hasta formar una pasta. Remojar los frijoles mungo en agua fría durante diez minutos en una cazuela de barro, luego cocinar a fuego alto durante aproximadamente 1,5 minutos (no se deben cocinar por mucho tiempo). Los frijoles mungo aún no están maduros en este momento. Vierta agua de frijol mungo en flores de frangipani y bébala una vez al día por la mañana y por la noche. Tiene un buen efecto en el tratamiento de las úlceras bucales. Pastillas de Liushen: Tome 1 pastilla de Liushen (30 pastillas) y muela hasta convertirla en polvo, agregue 2 ml de agua fría y sumérjala hasta obtener una pasta fina para su uso posterior. Antes de usar, primero limpie la boca del paciente, luego sumerja un hisopo de algodón delgado en la solución de la píldora Liushen y aplíquelo sobre la superficie de la úlcera. Lo mejor es tomar el medicamento de 1 a 15 minutos antes de las comidas, tres veces al día y una vez antes de acostarse. Por lo general, se necesitan 5 minutos para lograr el efecto analgésico. Las úlceras pequeñas se pueden curar en 1 o 2 días y las úlceras grandes se pueden curar en 5 días. Yunnan: Use Yunnan Baiyao para aplicación externa en heridas de úlceras orales, dos veces al día, y generalmente sana en 2 a 3 días. Leche entera en polvo: Elija leche entera en polvo, de 2 a 3 veces al día, 1 cucharada cada vez, agregue un poco de azúcar y beba con agua hirviendo. Es mejor tomarlo por la noche antes de acostarse. Generalmente, los síntomas de la úlcera desaparecen en 2 días. Sandía: Tome media sandía, saque la pulpa, exprima el jugo, sostenga el jugo en la boca, tráguelo después de aproximadamente 2 a 3 minutos, luego sostenga el jugo nuevo en la boca, repita varias veces. Vitamina C: Triturar 1 a 2 tabletas de vitamina C, colocar sobre la superficie de la úlcera, esperar un rato, 2 veces al día. Cimetidina: muela de 1 a 2 tabletas de cimetidina hasta obtener un polvo fino, sumerja un hisopo de algodón en el polvo y aplíquelo sobre la superficie de la úlcera. Sin agua durante 10 minutos, dos veces al día. Pastillas de Liuwei Dihuang: Tome las pastillas de Liuwei Dihuang por vía oral, 2 a 3 veces al día, de 6 a 8 g cada vez. Té fuerte: el "Compendio de Materia Médica" de la Farmacopea de la Dinastía Ming de mi país dice: "El té tiene un sabor amargo y frío, y es mejor para reducir el fuego... Cuando se reduce el fuego, el líquido será claro, según la investigación". Contiene taninos, que tienen un efecto astringente, y hacer gárgaras con té fuerte puede promover la curación de las úlceras bucales. Gentamicina: Sumerja un hisopo de algodón esterilizado en 2 ml de 40.000 unidades de inyección de gentamicina y aplíquelo suavemente sobre la superficie de la úlcera oral. Pasados unos minutos volver a aplicar, cuatro veces al día, es decir, después de las tres comidas y antes de acostarse. Aplique el medicamento después de hacer gárgaras en la boca y, por lo general, tardará de 2 a 3 días en recuperarse. Tomates: Mantenga el jugo de tomate en la boca durante unos minutos a la vez, varias veces al día. Escarcha de caqui: Saque la escarcha de caqui de los caquis y bébala con agua hirviendo o agréguela a la papilla.
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- Haga una preguntaLos efectos de las píldoras Wuji Baifeng en realidad se exageran y se abusa de ellos. Sí, la píldora Wuji Baifeng se puede utilizar para regular algunos síntomas ginecológicos, pero es una medicina tradicional china con un amplio abanico de aplicaciones, por lo que es adecuada para algunas personas y para otras no. Se recomienda acudir al hospital para recibir un diagnóstico antes de su uso. Por supuesto, esto no significa que la píldora Wuji Baifeng sea ineficaz. Puede que sea eficaz para muchas personas, pero para muchas personas, su baile se vuelve más caótico y peor. [Mito] Las mujeres de cierta edad no son ajenas a las píldoras Wuji Baifeng. Es un medicamento utilizado por las mujeres para regular y tratar enfermedades. Así lo han dicho practicantes de la medicina china y mujeres de todas las edades. Si tiene malestar estomacal, tome algunas pastillas de Wuji Baifeng; si tiene leucorrea excesiva y menstruación irregular, tome una o dos cajas. Incluso ahora, la medicina china advierte a las mujeres que aman la belleza que no gasten dinero en ningún producto de belleza. Tome dos pastillas de Wuji Baifeng todos los días. No es caro y el efecto es más obvio que cualquier otra cosa. En cuanto a tomarlo o no, no importa. Después de todo, es medicina china. ¿Cuáles son los efectos secundarios? Comer es mejor que no comer. Pero algunas personas a mi alrededor dijeron que la píldora Wuji Baifeng no es una panacea que pueda curar todas las enfermedades. Por ejemplo, para los síntomas de la menstruación irregular, algunas mujeres lo toman y el problema realmente se resuelve y otras lo toman, y cuanto más lo toman, más desordenadas se vuelven; Entonces, ¿qué tipo de medicamento es la píldora Wuji Baifeng? ¿Qué tan amplio es su ámbito de aplicación? Con estas preguntas, entramos en la Academia de Medicina Tradicional China de Shanxi y le pedimos a Zhang Yufen, un médico jefe de 66 años y una de las autoridades en ginecología de la medicina tradicional china, que hablara sobre las píldoras Wuji Baifeng. [Los expertos en medicina tradicional china dicen]: Las píldoras Wuji Baifeng son una suma y resta de las píldoras Wuji grandes y pequeñas en el libro antiguo "Yin Ji Lun Gang" y se estima que tienen una historia de cien años. En el pasado, los pollos de huesos negros eran tan valiosos que sólo se utilizaban en la corte real. Hoy en día, el pollo sedoso es muy utilizado entre la gente porque se puede ver en todas partes. Debido a que es recetado, la dosis es fija sin importar qué fabricante la produzca. Consiste en pollo de hueso negro, ginseng, astrágalo, salvia, angélica, raíz de peonía blanca, Ligusticum chuanxiong, rehmannia cruda, raíz de rehmannia, regaliz, cyperus rotunda, crema de astas, crema de astas, bupleurum, ostras, caparazón de tortuga, pulpo de morera, fruta gorgona, ñame, Tian Made of winter y otras 20 hierbas medicinales chinas. Entre ellos, el astrágalo y el ginseng se utilizan para reponer el qi; el pegamento de asta y la pasta de pegamento de asta se utilizan para nutrir el hígado y los riñones; la manta se utiliza para recolectar el yang de riñón, Chuanxiong, raíz de peonía blanca y rehmannia cruda, comúnmente conocida; como decocción de Siwu, se utilizan para nutrir la sangre. Salvia miltiorrhiza, ostra, caparazón de tortuga se utilizan para activar la circulación sanguínea y disipar el estancamiento, nutrir el yin y calmar los nervios y el yinbupleurum y el caparazón de tortuga tienen la función de eliminar el calor debido a la deficiencia; nutre el yin; el ñame y la gorgona tienen la función de fortalecer el bazo, eliminar la humedad, fortalecer el riñón y detener los vendajes. Cyperus rotundus es un medicamento para regular el qi. Del análisis anterior se puede ver que la píldora Wuji Baifeng es una medicina tradicional china que puede nutrir el qi y la sangre, regular la menstruación y detener el sangrado y reponer el yin y el yang. Debido a esto, la píldora Wuji Baifeng no es específica para el tratamiento de enfermedades, es decir, no es un medicamento ginecológicamente eficaz. Por ejemplo, la menstruación irregular es una enfermedad ginecológica común. Aunque la mayoría de las personas tienen síntomas similares, las causas son diferentes y pueden ser causadas por deficiencia de qi, deficiencia de yin, calor interno, fuego del hígado y otros factores. En general, la medicina tradicional china utiliza las píldoras Buzhong Yiqi para tratar la menstruación irregular causada por la deficiencia de qi causada por la deficiencia de yin y el calor interno, es decir, el calor de la sangre, la decocción de Liangdi se usa para tratar la menstruación irregular causada por el calor del hígado; , Las pastillas Danwei Xiaoyao se utilizan como tratamiento. No hay necesidad de píldoras Wuji Baifeng. Por otro ejemplo, hay muchos síntomas de flujo vaginal en las mujeres, como flujo vaginal debido a deficiencia renal, flujo vaginal debido a deficiencia del bazo, flujo vaginal debido a la humedad y el calor, etc. Si se trata simplemente de una deficiencia del bazo, se deben usar las píldoras Buzhong Yiqi y las píldoras Wuji Baifeng, pero el efecto terapéutico no es bueno. El síndrome de deficiencia renal se divide en deficiencia de yang de riñón y deficiencia de yin de riñón. La deficiencia de yin del riñón se trata con la decocción de Liuwei Dihuang y la deficiencia de yang del riñón se trata con las píldoras Guiyou. En climas tropicales húmedos, Yihuang Tang es mucho mejor que las píldoras Wuji Baifeng. Por ejemplo, el Dr. Zhang dijo que si usted sufre de vaginitis por tricomonas y tiene leucorrea excesiva, incluso comer 100 cajas de píldoras Wuji Baifeng es inútil. La teoría de la medicina tradicional china enfatiza la diferenciación y el tratamiento de los síndromes. Solo cuando los síntomas en el cuerpo sean consistentes con las píldoras Wuji Baifeng, tomar las píldoras Wuji Baifeng será efectivo. De lo contrario, es mejor utilizar otros medicamentos. Es por eso que algunas personas son aptas para tomar las píldoras Wuji Baifeng, mientras que otras son inútiles. En cuanto a la función de belleza de la píldora Wuji Baifeng, los expertos en medicina tradicional china creen que su función ha sido exagerada. Si hay que decir que existe, solo puede significar que la persona que toma el medicamento se encuentra dentro del rango de tratamiento de la píldora Wuji Baifeng. Por ejemplo, si las manchas y los colores en la cara del paciente son causados por deficiencia de qi, deficiencia de sangre, deficiencia de yin y deficiencia de yang, pueden mejorar después de tomar medicamentos y lograr el llamado efecto cosmético. Por otro lado, si el problema de la piel es causado por otras razones, tomar las píldoras Wuji Baifeng no tendrá ningún efecto. Los expertos en medicina tradicional china finalmente enfatizaron que, en general, las píldoras Wuji Baifeng tienen más ingredientes para nutrir el yang y los riñones, y menos ingredientes para nutrir el yin. Este medicamento sólo es adecuado para pacientes con deficiencia de Qi y sangre y deficiencia de yin. Como dice el refrán, son tres partes de veneno. Solo porque las píldoras Wuji Baifeng son medicina tradicional china, puedes tomarlas de manera informal. Cuando se tiene un problema físico, se debe acudir a un hospital habitual, pedir un diagnóstico a un médico y proponer un plan de medicación para los síntomas individuales.
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