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Incubar con agitación vigorosa a 37 °C durante aproximadamente 2 a 3 horas (200 a 300 r/min en una mesa giratoria) y medir el valor de OD600 ≈ 0,4 cada 20 a 30 minutos. 2. En condiciones estériles, transfiera las bacterias. Conservado en hielo Colóquelo en un tubo de centrífuga de polipropileno frío de 50 ml sobre hielo durante 10 a 20 minutos. 3. Centrifugar a 4000 rpm durante 10 minutos a 4°C utilizando un rotor Sorvall GS2 (o un rotor que coincida con su tubo de centrífuga) para recuperar las células. 4. Cuente el medio de cultivo e invierta el tubo de ensayo durante 65438 ± 0 minutos para agotar el último rastro restante de medio de cultivo. 5. Suspender cada sedimento con 10 ml de CaCl2 0,1 mM enfriado con hielo y colocarlo en hielo. 6. Centrifugar a 4000 rpm durante 10 minutos a 4°C utilizando un rotor Sorvall GS3 (o su rotor correspondiente) para recuperar las células. 7. Vierta el medio de cultivo e invierta el tubo de ensayo durante 65,438±0 minutos para drenar el último rastro restante de medio de cultivo. 8. Resuspender 2 ml de 0,1 MCaCl2 preenfriado con hielo por cada 50 ml del cultivo inicial, luego dividir rápidamente las células en pequeñas porciones, congelarlas en nitrógeno líquido y almacenarlas a -70°C para su uso posterior. 9. Utilice una punta estéril enfriada para extraer 200 μl de cada suspensión celular competente, transfiérala a un tubo de microcentrífuga estéril y agregue ADN o mezcla de reacción de ligadura a cada tubo (volumen ≤ 10 μl, ADN ≤ 50 ng), agite suavemente para mezclar el contenido. y colocar en hielo durante 30 minutos. 10. Coloque el tubo de centrífuga en la gradilla de tubos de ensayo y colóquelo en un baño de agua circulante precalentado a 40 °C durante 90 segundos a 2 minutos. No agite el tubo de ensayo. 11. Transfiera rápidamente el tubo de ensayo a un baño de hielo y deje que las células se enfríen durante 1 a 2 minutos. 12. Agregue 800 µl de medio SOC a cada tubo de centrífuga, caliente el medio a 37 °C en un baño de agua, luego transfiera el tubo de ensayo a un agitador a 37 °C e incube durante 45 minutos para resucitar las bacterias y expresar el antibiótico. gen marcador de resistencia codificado por el plásmido. 13. Transfiera un volumen apropiado (hasta 200 μl por placa de 90 mm) de células competentes transformadas a un medio SOB que contenga 200 mmol/l de MgSO4 y los antibióticos correspondientes. 14. Dejar el plato a temperatura ambiente hasta que se absorba el líquido. 15. Invierta la placa y cultívela a 37°C. Las colonias aparecerán después de 12 a 16 horas. Método 2: Cassuperone-stepcompontcellprepkit utiliza un método simple para tratar E. coli y convertirla en una célula competente, lo que facilita la transformación del ADN plasmídico y puede cumplir con los requisitos de los experimentos generales. En comparación con el método CaCl2_2, tiene muchas ventajas: es fácil de usar y la preparación de células competentes se puede completar en un solo paso. La eficiencia de transformación es ligeramente mayor que la del método CaCl2_2, alcanzando generalmente 106-108 ufc/μg; que cumple con los requisitos para experimentos generales necesarios. Las células competentes se pueden almacenar a -70 °C sin agregar glicerol después de prepararlas, y su viabilidad no disminuirá significativamente después de un almacenamiento prolongado. Preparación: 1. Se cruzaron cepas de E. coli congeladas extraídas de nitrógeno líquido o de refrigeradores de baja temperatura en placas LB y crecieron colonias individuales después de 37 noches. Elija dos colonias individuales con morfología completa, inóculalas en 5 ml de medio LB respectivamente y cultívelas durante la noche a 37 ° C y 250 rpm. 2. Al día siguiente, tomar 200 µl de 5 ml de cultivo LB, transferirlos a 50 ml de medio de cultivo LB (matraz Erlenmeyer de 250 ml) y cultivarlo a 37°C y 250 rpm durante 2 horas. La OD600 es aproximadamente 0,4-0,5. Preparación de células competentes: 3. Pipetear 1 ml de solución bacteriana en un tubo de centrífuga de 1,5 ml, centrifugar a 5000 rpm durante 5 minutos y desechar el sobrenadante. 4. Agregue 100 µl de solución a preenfriada, suspenda las bacterias y manténgalas en un baño de hielo durante 30 minutos. 5. En este punto, las células competentes están listas para su uso inmediato o almacenamiento a -70°C. Transformación celular: 6.
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En las últimas décadas, los científicos han recopilado una gran cantidad de información valiosa sobre el envejecimiento estudiando muchos organismos, desde microorganismos simples como levaduras y nematodos hasta mamíferos como ratones, perros y monos. El contenido de la investigación es relativamente de gran alcance, como el uso de una reducción calórica extrema (CR) para prolongar la juventud. Este método es efectivamente efectivo, porque ya sean organismos primitivos en el laboratorio o mamíferos como ratones, perros, monos, etc., después de controlar estrictamente las calorías (calorías), además de diversos datos fisiológicos y manifestaciones externas, la esperanza de vida promedio. ha sido Para extender significativamente la vida útil, algunos organismos pueden incluso extender su vida útil en un 40%. No hay absolutamente ningún problema en convertirse en centenario en términos humanos. Debido a que el control extremo sobre la ingesta calórica es demasiado difícil para los humanos con libre albedrío, los científicos comenzaron a buscar otras alternativas viables. El resveratrol, que goza de gran popularidad últimamente, es uno de los representantes. Se descubrió que el resveratrol prolonga la vida útil al modular las propiedades de las proteínas, de manera similar a reducir la ingesta calórica. Dicho esto, no se ha demostrado en estudios en humanos. Un ejemplo más reciente es el estudio de los telómeros en los cromosomas celulares. La división celular en los organismos se ve afectada por la longitud de los telómeros y la telomerasa controla la tasa de acortamiento de los telómeros. Los científicos creen que mientras se pueda regular la telomerasa, se pueden descubrir los secretos del crecimiento de las células cancerosas y de las células normales, ayudar a retrasar el envejecimiento e incluso tratar el cáncer. ¿Se ha anunciado "Factor Juventud"? Un área de la investigación antienvejecimiento se ha vuelto muy candente en los últimos tres o cuatro años. Universidades famosas como Harvard, Stanford, Cambridge, etc. Todos han participado en él y han publicado artículos de investigación relevantes en "Nature (2015 1)", "Science (2014)" y "Cell (2066)". Este campo se llama Parabiosis, que en chino se traduce como "nacimiento * * * heterogéneo" o "convivencia". La simbiosis (parabiosis) se refiere a dos organismos diferentes conectados entre sí a través de medios naturales o artificiales y que comparten los mecanismos de vida de cada uno. Estos estudios implicaron suturar quirúrgicamente partes del cuerpo de dos ratones de diferentes edades para conectar sus vasos sanguíneos y su sangre. Aunque parezca increíble, estos estudios han mostrado resultados emocionantes: los ratones viejos que han pasado el período de simbiosis son como si renacieran, y todos los indicadores de vida muestran signos de rejuvenecimiento, incluido el cerebro, el corazón, los órganos vitales, incluidos el hígado y los músculos, también. mostraron una función y vitalidad similares a las de los ratones jóvenes. Parece haber algún secreto juvenil en la sangre de los ratones jóvenes, que es suficiente para rejuvenecer los órganos de los ratones. De hecho, los científicos han aislado una proteína de la sangre de animales jóvenes cuya función principal es iniciar la capacidad de regeneración y reparación de las células madre. Dr. Wang Guolin El eterno deseo de la humanidad es ser joven para siempre. Desde la antigüedad, mantenerse joven y prolongar la vida ha sido un deseo universal de la humanidad, y la búsqueda de la receta secreta de la juventud nunca ha cesado. Diversas medicinas a base de hierbas, remedios caseros e incluso comportamientos extraños están atrayendo a fanáticos específicos bajo el lema de mantener la juventud para siempre. El método taoísta de exhalar alquimia es el más familiar para el público, pero algunos también creían en otros comportamientos que la gente moderna considera absurdos, como beber la sangre de niños pequeños y tener relaciones sexuales con vírgenes, en una época en la que la gente no iluminado. En esta era moderna donde la ciencia reina y la evidencia es primordial, los laboratorios avanzados de muchas universidades reconocidas han comenzado a convertirse en la cabeza de puente en la guerra antienvejecimiento de la humanidad. El investigador de arriba, busca en el vacío verde, abajo, la primavera amarilla, desde el estudio de los microorganismos hasta los mamíferos avanzados, intentando resolver el misterio de la juventud.
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